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[Ｆ−７ 遺伝子組換え生物の開放系利用による遺伝子移行と生物多様性への影響評価に関する研究]
（１）遺伝子組換え微生物の微生物多様性への影響評価手法の開発に関する研究
�ぁ“�生物多様性に及ぼす組換え魚の影響に関する研究
独立行政法人 国立環境研究所
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化学物質環境リスク研究センター 健康リスク評価研究室
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青木康展
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<研究協力者>
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独立行政法人 国立環境研究所
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化学物質環境リスク研究センター 健康リスク評価研究室
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天沼喜美子、橋本顯子
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[平成15〜17年度合計予算額]
平成l5〜17年度合計予算額 17,207千円
(うち、平成17年度予算額 5,342千円)
※上記の予算額には、間接経費 3,971千円を含む
［要旨］
本サブテーマの目標は、魚のゲノムDNAに導入された外来性遺伝子が、微生物に移行する可能性を明らかにすることである。我々はrpsLトランスジェニックゼブラフィッシュを作出しているが、この遺伝子導入魚のゲノムDNAには、大腸菌のカナマイシン耐性を決定する遺伝子KanRが載ったプラスミド（pML4）が組み込まれている。このrpsLトランスジェニックゼブラフィッシュを活用してpML4をモデル・プラスミドとして、外来性遺伝子の微生物への移行の可能性を検討した。
この可能性を検証する前提条件として、純化したpML4が代表的な腸内細菌である大腸菌（E. coli）や代表的土壌細菌シュードモナス（P. putida）に移行し、カナマイシン耐性を獲得しうるか否かを検討した。最も単純な実験系として、pML4とその適切なホストである大腸菌RR1との共存によって、大腸菌RR1が形質転換するか調べるために、菌の状態としてもっとも形質転換し易い対数増殖期にpML4とRR1を共存させて形質転換するか検討した。その結果、RR1がカナマイシン耐性を獲得する頻度は9x108個に１個未満であることが示された。また、最も形質転換しやすいエレクトロポレーション法を用いても、pML4によりシュードモナスがカナマイシン耐性を獲得する頻度は、2.8x108個のうち１個未満であることが示された。
さらに、遺伝子導入ゼブラフィッシュを用いて、遺伝子導入魚から外来性遺伝子が腸内細菌に移行する可能性を検討した。�＾篥岨卞各�ゼブラフィッシュの糞、��好気培養あるいは嫌気培養した腸内細菌、��死亡した遺伝子導入ゼブラフィッシュから周辺の細菌への移行の3条件について検討した結果、Km耐性菌が多数存在することが示された。しかし、その中に導入遺伝子の移行は確認されなかった。（pML4保持菌比率10-3-10-6以下）
従来、遺伝子組み換え動物からの周辺微生物への遺伝子移行は、ほとんど調べられていない。本研究において初めて、周辺微生物への移行が極めて起こりにくいことを定量的に示すことができた。
［キーワード］
遺伝子導入魚、腸内細菌、土壌細菌、薬剤耐性、遺伝子移行
(2.29MＢ)
