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○分析フロー図
１. 生物中の飽和直鎖脂肪族炭化水素
２. 生物中のバナジウム、ニッケル
３. 生物中の非イオン界面活性剤
┌──────┐
│ 試料の採取 │ 20〜50ｇ [還流冷却器付フラスコ]
└──┬───┘
│←１Ｎ 水酸化カリウム・エタノール溶液 50 mL
┌──┴───┐
│アルカリ分解│ 加熱還流 1.5 時間
└──┬───┘
│← n-ヘキサン 50mL
┌──┴───┐
│ 振 と う │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 遠心分離 │ 3,000 rpm 10分間
└──┬───┘
├───────────────────┐
┌──┴───┐ ┌──┴───┐
│ヘキサン層 ├──────┐ │ 生 物 層 │
└──┬───┘ │ └──┬───┘
│ │ ┌──┴───┐
│ │ │ 振 と う │
│ │ └──┬───┘
│ │ ┌──┴───┐
│ │ │ 遠心分離 │
│ │ └──┬───┘
│ │ ├─────────┐
│ │ ┌──┴───┐ ┌──┴───┐
│ └─────┤ ヘキサン層 │ │ 生 物 層 │
│ └──────┘ └──────┘
┌──┴───┐
│ 水 洗 │ 15％ 塩化ナトリウム含有精製水で数回
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 脱 水 │ 無水硫酸ナトリウム
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 濃 縮 │ １mL （ＫＤ濃縮器又はロータリーエバポレーター）
└──┬───┘
┌───┴────┐ ・無水硫酸ナトリウム 3g （上層）
│シリカゲルカラム│ ・ワコーゲルＳ−１ 3g （下層）
└───┬────┘
┌──┴───┐
│ 溶 離 │ n-ヘキサン 200 mL
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 濃 縮 │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 定 容 │
└──┬───┘
┌──┴───┐ Ｃ８〜Ｃ２８の n-パラフィンの定量
│ GC/MS測定 │ ベンゾ（a）ピレンの定量
└──────┘ ジベンゾチオフェンの定量
○ガスクロマトグラフ質量分析計の測定条件
測定質量数 ： Ｃ８〜Ｃ２８の n-パラフィン 57, 71, 43
ベンゾ（a）ピレン 252,250
ジベンゾチオフェン 184,139
内標準 ： ｎ−パラフィン クリセン d12 ベンゾ(a)ピレン d12 アセナフテン d10 フェナントレン d10
ベンゾ（a）ピレン クリセン d12 ベンゾ(a)ピレン d12
ジベンゾチオフェン アセナフテン d10
《ベンゾ（a）ピレン、ジベンゾチオフェン》
注入方式 ： スプリットレス
注入量 ： １μＬ
イオン化法 ： ＥＩ
カラム槽温度： 40℃(3min) → 150℃ → 250℃ → 280℃ → 310℃(3min)
10℃/min 8℃/min 5℃/min 20℃/min
カラム ： ＳＧＥ ＢＰＸ−５ 25 m × 0.22 mm (膜厚) 0.25μm
キャリアーガス ： ヘリウム
測定モード ： ＳＩＭ
《パラフィン類》
注入方式 ： スプリットレス
注入量 ： １μＬ
イオン化法 ： ＥＩ
カラム槽温度： 40℃(3min) → 310℃(3min)
5℃/min
カラム ： Ｊ＆Ｗ ＤＢ−１ 30 m × 0.32 mm (膜厚) 0.25μm
キャリアーガス ： ヘリウム
測定モード ： ＳＩＭ
参考：平成２年版 化学物質と環境
沿岸環境調査マニュアル[底質・生物編]
┌──────┐
│試料の採取 │ 1ｇ
└──┬───┘
│←硝酸 20 mL
├────────────────┐
┌──┴───┐ │
│ 加熱分解 │ 時計皿でふたをする │
└──┬───┘ │色が薄くなり、油膜などが認められ
│← n-ヘキサン 50mL │なくなるまで３〜６回程度繰り返す。
┌──┴───┐ │
│ 加熱濃縮 │ 約180℃ │
└──┬───┘ │
│←硝酸 10 mL │
├────────────────┘
┌──┴───┐
│ 定 容 │ 100 mL ○ＩＣＰ質量分析計測定条件
└──┬───┘
│ 内標準 ：スカンジウム
┌──┴───┐ キャリアガス ：アルゴン 1.13 L/min
│ 希 釈 │ ２倍 ＲＦパワー：１２８０Ｗ
└──┬───┘
│
┌──┴─────┐
│ＩＣＰ−ＭＳ測定│
└────────┘ 参考：ＪＩＳ Ｋ０１０２ ５．１
┌──────┐
│ 試料の粉砕 │ ミキサーでホモジナイズ
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 試料の採取 │ 10〜30g ［還流冷却器付フラスコ］
└──┬───┘
│← エタノール：水 （１＋１） 50 mL
┌──┴───┐
│ 加熱抽出 │ 30分間 ２回繰り返す
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ ろ 過 │ No.5C のろ紙でろ過
└──┬───┘
├─────────────────┐
┌──┴───┐ ┌───┴──┐
│ ろ 液 │ │ 残 さ │
└──┬───┘ └──────┘
┌──┴───┐
│ イオン交換 │ 陰イオン、陽イオン交換カラム Dowex 50W-X4 10cm 1-X4 10cm
└──┬───┘
│← エタノール （１＋１） 100 mL
│← クロロホルム 50 mL
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│ 振 と う │ ５分 [分液ロート]
└──┬───┘
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┌───┴────┐ ┌───┴──┐
｜ クロロホルム層 │ │ 水 層 │
└───┬────┘ └──────┘
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│ 遠心分離 │ 4000 rpm 10分
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 脱 水 │ 溶媒ろ紙(1PS)
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 溶媒揮散 │ 40℃程度 [ロータリ-エバポレーター]
└──┬───┘
│ ←クロロホルム ２ mL
┌──┴───┐
│ 溶 解 │
└──┬───┘
┌───┴────┐
│カラムクロマト │ S-1 3g
└───┬────┘
│ ←クロロホルム 50 mL
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│ 展 開 │
└──┬───┘
│ ←メタノール 50 mL
┌──┴───┐
│ 流 出 │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 溶媒揮散 │ 40℃程度 [ロータリ-エバポレーター]
└──┬───┘
│ ←メタノール 1 mL
┌──┴───┐
│ アンプル │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 乾 燥 │ 60℃
└──┬───┘
│ ←臭化水素酸−酢酸（１：１） 0.5 mL
┌──┴───┐
│ 密 封 │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 加熱分解 │ 150℃ 5時間
└──┬───┘
│ ←水洗 5 mL
┌──┴───┐
│ 放 冷 │
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 分 解 液 │
└──┬───┘
│ ←二硫化炭素 0.5 mL
┌──┴───┐
│ 振 と う │ １分間
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 遠心分離 │ 2500 rpm 5分間
└──┬───┘
┌──┴───┐
│ 静 置 │
└──┬───┘
├────────────────┐
┌──┴───┐ ┌──┴───┐
│ 水 層 │ │二硫化炭素層│
└──────┘ └──┬───┘
┌────────────────┘
│メタノール転溶し水を加えて5mL
┌──┴───┐
│ GC/MS測定 │
└──────┘
○パージ＆トラップ−ガスクロマトグラフ質量分析計の測定条件
≪パージ＆トラップ≫
パージ
パージ ：室温で４．５分間
ドライパージ ：室温で３分間
トラップ
トラップ管充填材：2,6-ジフェニル-1,4-ジフェノキシドポリマー
脱着温度 ：２３０℃
クライオフォーカス
吸着温度 ：−１３０℃
脱着温度 ： １８０℃
≪ガスクロマトグラフ質量分析計測定条件≫
注入方式 ：スプリットレス
イオン化法 ：ＥＩ
カラム槽温度： 40℃ → 80℃ → 125℃ → 250℃(1.75min)
10℃/min 5℃/min 20℃/min
カラム ： Ｊ＆Ｗ ＤＢ-1301 60 m × 0.25 mm (膜厚) 1μm
キャリアーガス ： ヘリウム １mL/min
測定方法 ： スキャン
測定質量数 ： 55〜550
内標準 ： フルオロベンゼン
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