○作物残留に係る農薬登録保留基準を改正する件

〔平成一四・四・二四環告三五〕

　農薬取締法第三条第二項の規定により定められた同条第一項第四号から第七号までに掲げる場合に該当するかどうかの基準を定める等の件第一号イの環境大臣の定める基準を定める件（昭和四十八年七月環境庁告示第四十六号）の一部を次のように改正し、公布の日から適用する。

　１の表３、７、９、１３―テトラメチル―５、１１―ジオキサ―２、８、１４―トリチア―４、７、９、１２―テトラアザペンタデカ―３、１２―ジエン―６、１０―ジオン（別名チオジカルブ）の項を次のように改める。

　１の表（Ｅ）―Ｎ―［（６―クロロ―３―ピリジル）メチル］―Ｎ′―シアノ―Ｎ―メチルアセトアミジン（別名アセタミプリド）の項を次のように改める。

　１の表（１０Ｅ，１４Ｅ，１６Ｅ，２２Ｚ）―（１Ｒ，４Ｓ，５′Ｓ，６Ｓ，６′Ｒ，８Ｒ，１２Ｓ，１３Ｓ，２０Ｒ，２１Ｒ，２４Ｓ）―６′―［（Ｓ）―ｓｅｃ―ブチル］―２１，２４―ジヒドロキシ―５′，１１，１３，２２―テトラメチル―２―オキソ―３，７，１９―トリオキサテトラシクロ［１５．６．１．１^４，８．０^{２０，２４}］ペンタコサ―１０，１４，１６，２２―テトラエン―６―スピロ―２′―（５′，６′―ジヒドロ―２′Ｈ―ピラン）―１２―イル　２，６―ジデオキシ―３―Ｏ―メチル―４―Ｏ―（２，４，６―トリデオキシ―３―Ｏ―メチル―４―メチルアミノ―α―Ｌ―リキソ―ヘキソピラノシル）―α―Ｌ―アラビノ―ヘキソピラノシド　ベンゾアート（以下「エマメクチンＢ_１ａ安息香酸塩」という。）及び（１０Ｅ，１４Ｅ，１６Ｅ，２２Ｚ）―（１Ｒ，４Ｓ，５′Ｓ，６Ｓ，６′Ｒ，８Ｒ，１２Ｓ，１３Ｓ，２０Ｒ，２１Ｒ，２４Ｓ）―２１，２４―ジヒドロキシ―６′―イソプロピル―５′，１１，１３，２２―テトラメチル―２―オキソ―３，７，１９―トリオキサテトラシクロ［１５．６．１．１^４，８．０^{２０，２４}］ペンタコサ―１０，１４，１６，２２―テトラエン―６―スピロ―２′―（５′，６′―ジヒドロ―２′Ｈ―ピラン）―１２―イル　２，６―ジデオキシ―３―Ｏ―メチル―４―Ｏ―（２，４，６―トリデオキシ―３―Ｏ―メチル―４―メチルアミノ―α―Ｌ―リキソ―ヘキソピラノシル）―α―Ｌ―アラビノ―ヘキソピラノシド　ベンゾアート（以下「エマメクチンＢ_１ｂ安息香酸塩」という。）の混合物（別名エマメクチン安息香酸塩）の項を次のように改める。

　１の表メチル（ＲＳ）―７―クロロ―２、３、４ａ、５―テトラヒドロ―２―［メトキシカルボニル（４―トリフルオロメトキシフェニル）カルバモイル］インデノ［１、２―ｅ］［１、３、４］　オキサジアジン―４ａ―カルボキシラート（別名インドキサカルブＭＰ）の項を次のように改める。

　１の表メチル　（Ｅ）―２―｛α―［２―イソプロポキシ―６―（トリフルオロメチル）ピリミジン―４―イルオキシ］―ｏ―トリル｝―３―メトキシアクリラート（別名フルアクリピリム）の項の次に次のように加える。

　２（２０７）ウＡ法中「３００ｍｌの分液漏斗に量り取り、」を「３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、」に、「分液漏斗に戻してアセトン５０ｍｌを加え、」を「三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、」に、「これに酢酸エチル１００ｍｌを加え、」を「この水層に酢酸エチル１００ｍｌを加え、」に改め、２（２０７）ウＢ法中「３００ｍｌの分液漏斗に量り取り、水１０ｍｌを加えて２時間放置する。」を「３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、水２０ｍｌを加えて２時間放置する。」に改め、２（２０７）エを次のように改める。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面にポリエチレングリコールを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜１００℃。

　分離管槽昇温プログラム　５０℃で２分保ち、５０〜約２８０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　メチル　チオアセトヒドロキサマートの０．１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

　２（２７５）を次のように改める。

　（２７５）　アセタミプリド試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　ケイ酸マグネシウムミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム９１０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　Ｃ_１８シリカゲルミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用Ｃ_１８シリカゲル（シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　アセタミプリド標準品　本品は、アセタミプリド９９％以上を含み、融点は９８．９℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（麦・雑穀及び豆類の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン６０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル１００ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）を加えて溶かし、２０ｍｌとする。

　あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これに上記溶液の５ｍｌ（麦・雑穀の場合は１０ｍｌ、豆類の場合は４ｍｌ）を分取して流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液（７：３）２０ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、Ｃ_１８シリカゲルミニカラムにアセトニトリル５ｍｌ、次いで蒸留水５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）を加えて溶かし、５ｍｌ（麦・雑穀、豆類、鱗茎類及びてんさいの場合は２ｍｌ）として試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０�pのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）を用い、アセタミプリドが１２〜１７分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２４５ｎｍで測定する。

　感度　アセタミプリドの１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　アセタミプリド標準品の５００ｍｇ／Ｌアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）で希釈して０．０５〜１ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを２０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってアセタミプリドの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりアセタミプリドの重量を求め、これに基づき、検体中のアセタミプリドの濃度を算出する。

　２（３０９）ウＢ法中「これにナス型フラスコ中の溶液を毎分５ｍｌ以下の流速で流し入れ、酢酸エチル１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、」を「これにナス型フラスコ中の溶液を毎分５ｍｌ以下の流速で流し入れ、次いで酢酸エチル１０ｍｌでナス型フラスコを洗い、その洗液を同様に流し入れ、全溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、」に改める。

　２（３６０）の次に次のように加える。

　（３６１）　カルフェントラゾンエチル試験法

ア　装置　アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトン　アセトン（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　ガラス繊維ろ紙　化学分析用ガラス繊維ろ紙

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ１５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）３６０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　カルフェントラゾンエチル標準品　本品は、カルフェントラゾンエチル９７．６％以上を含み、融点は−２０℃以下である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１００ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液（９：１）１５ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

　この残留物にアセトンを加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面に５０％フェニルメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜１００℃

　分離管槽昇温プログラム　５０℃で２分保ち、５０〜約２８０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　カルフェントラゾンエチルの０．２ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　カルフェントラゾンエチル標準品の０．１〜２ｍｇ／Ｌアセトン溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってカルフェントラゾンエチルの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりカルフェントラゾンエチルの重量を求め、これに基づき、検体中のカルフェントラゾンエチルの濃度を算出する。

　（３６２）　トルフェンピラド試験法

ア　装置　アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトン　アセトン（特級）

　ジエチルエーテル　ジエチルエーテル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　トルフェンピラド標準品　本品は、トルフェンピラド９９．１％以上を含み、融点は８６．８〜８８．３℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１２０ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサンを加えて溶かし、１０ｍｌとする。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これに上記溶液の５ｍｌを分取して流し入れ、ヘキサン１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液（７：３）２０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトンを加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面に５％フェニルメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　２００〜２７０℃

　分離管槽昇温プログラム　１５０℃で２分保ち、１５０〜約２５０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　トルフェンピラドの０．１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　トルフェンピラド標準品の０．０５〜１ｍｇ／Ｌアセトン溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってトルフェンピラドの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりトルフェンピラドの重量を求め、これに基づき、検体中のトルフェンピラドの濃度を算出する。

　（３６３）　クロチアニジン試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　アルミナミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ１７１０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ポリスチレンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用スチレンジビニルベンゼン共重合体（ポリスチレン系ゲル、粒径８０〜１６０μｍ）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　クロチアニジン標準品　本品は、クロチアニジン９８％以上を含み、融点は１７６．８℃である。

ウ　試験溶液の調製

Ａ法（米、果実及び野菜の場合）

１）　検体２０ｇ相当の試料（米の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

２）　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１００ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル８０ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に酢酸エチル５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、アルミナミニカラムに酢酸エチル５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、酢酸エチル１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでアセトニトリル２０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

３）　この残留物に蒸留水及びメタノールの混液（３：１）を加えて溶かし、４ｍｌ（米の場合は２ｍｌ）として試験溶液とする。

Ｂ法（茶の場合）

　試料５ｇを３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、水２０ｍｌを加えて２時間放置する。これにアセトニトリル及び１ｍｏｌ／Ｌ塩酸の混液（１：１）１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻して同混液５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトニトリルを加えて２００ｍｌとする。これの４０ｍｌを３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で１０ｍｌに濃縮する。

　あらかじめ、ポリスチレンミニカラムにアセトニトリル５ｍｌ、次いで蒸留水５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水２０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでアセトニトリル１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水２０ｍｌを加えて溶かす。以下、この溶液についてＡ法の２）と同様の操作を行う。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液（３：１）を加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水及びメタノールの混液（３：１）を用い、クロチアニジンが１５〜２０分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２６５ｎｍで測定する。

　感度　クロチアニジンの１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　クロチアニジン標準品の５００ｍｇ／Ｌメタノール溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びメタノールの混液（３：１）で希釈して０．０５〜１ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを２０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってクロチアニジンの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりクロチアニジンの重量を求め、これに基づき、検体中のクロチアニジンの濃度を算出する。

　（３６４）　ジノテフラン試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　グラファイトカーボンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径９ｍｍ、長さ６０ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ジノテフラン標準品　本品は、ジノテフラン９９．８％以上を含み、融点は１０７．５℃である。

ウ　試験溶液の調製

Ａ法（米、果実及び野菜（だいこんの根及び葉を除く。）の場合）

１）　検体２０ｇ相当の試料（米の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液に塩化ナトリウム５．５ｇを加えて溶かし、多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン５０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル１００ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

２）　この残留物に酢酸エチル５ｍｌを加えて溶かす。あらかじめ、グラファイトカーボンミニカラムにメタノール５ｍｌ、次いで蒸留水５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水１０ｍｌ、次いで蒸留水及びメタノールの混液（９：１）１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。続いて蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）２５ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。酢酸エチル１２０ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水を加えて溶かし、４ｍｌ（米の場合は２ｍｌ）として試験溶液とする。

Ｂ法（だいこん根及び葉の場合）

　Ａ法の１）と同様の操作を行う。この残留物に酢酸エチル５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムに酢酸エチル５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、酢酸エチル１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びメタノールの混液（９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。以下、この残留物についてＡ法の２）と同様の操作を行う。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水、アセトニトリル及びメタノールの混液（９０：７：３）を用い、ジノテフランが９〜１４分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２７０ｎｍで測定する。

　感度　ジノテフランの１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　ジノテフラン標準品の５００ｍｇ／Ｌメタノール溶液を調製し、この溶液を蒸留水で希釈して０．０５〜１ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを２０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってジノテフランの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりジノテフランの重量を求め、これに基づき、検体中のジノテフランの濃度を算出する。