1の表S―2―エチルスルフィニル―1―メチルエチル ジメチル ホスホロチオアート(別名ESP)の項を削る。
1の表ブチル (RS)―2―[4―(5―トリフルオロメチル―2―ピリジルオキシ)フェノキシ]プロピオナート(別名フルアジホップ)又はブチル (R)―2―[4―(5―トリフルオロメチル―2―ピリジルオキシ)フェノキシ]プロピオナート(別名フルアジホップP)の項を次のように改める。
ブチル (RS)―2―[4―(5―トリフルオロメチル―2―ピリジルオキシ)フェノキシ]プロピオナート(別名フルアジホップ)又はブチル (R)―2―[4―(5―トリフルオロメチル―2―ピリジルオキシ)フェノキシ]プロピオナート(別名フルアジホップP) | みかん | 0.1ppm |
みかん以外のかんきつ類 | 0.1ppm | |
第二大粒果実類 | 0.1ppm | |
小粒果実類 | 0.1ppm | |
第二果菜類 | 0.1ppm | |
第一葉菜類 | 2ppm | |
第二葉菜類 | 0.2ppm | |
根・茎類 | 0.5ppm | |
鱗茎類 | 0.5ppm | |
いも類 | 0.1ppm | |
大豆 | 0.2ppm | |
大豆以外の豆類 | 5ppm | |
てんさい | 0.2ppm |
1の表1―(4―クロロフェニル)―3―(2、6―ジフルオロベンゾイル)尿素(別名ジフルベンズロン)の項を次のように改める。
1―(4―クロロフェニル)―3―(2,6―ジフルオロベンゾイル)尿素(別名ジフルベンズロン) | 第二果菜類 | 1ppm |
第二葉菜類 | 1ppm | |
根・茎類 | 0.5ppm | |
鱗茎類 | 0.05ppm |
1の表1―(2―シアノ―2―メトキシイミノアセチル)―3―エチル尿素(別名シモキサニル)の項を次のように改める。
1―(2―シアノ―2―メトキシイミノアセチル)―3―エチル尿素(別名シモキサニル) | 第一大粒果実類 | 0.1ppm |
小粒果実類 | 0.2ppm | |
第二果菜類 | 0.5ppm | |
第一葉菜類 | 0.2ppm | |
いも類 | 0.1ppm | |
大豆 | 0.1ppm |
1の表エチル 2―クロロ―5―(4―クロロ―5―ジフルオロメトキシ―1―メチルピラゾール―3―イル)―4―フルオロフェノキシアセタート(別名ピラフルフェンエチル)の項を次のように改める。
エチル 2―クロロ―5―(4―クロロ―5―ジフルオロメトキシ―1―メチルピラゾール―3―イル)―4―フルオロフェノキシアセタート(別名ピラフルフェンエチル) | 米 | 0.1ppm |
小麦 | 0.1ppm | |
小麦以外の麦・雑穀 | 0.1ppm | |
みかん | 0.1ppm | |
みかん以外のかんきつ類 | 0.1ppm | |
第一大粒果実類 | 0.1ppm | |
第二大粒果実類 | 0.1ppm | |
小粒果実類 | 0.1ppm | |
ナッツ類 | 0.1ppm | |
第一葉菜類 | 0.1ppm | |
第二葉菜類 | 0.1ppm | |
根・茎類 | 0.1ppm | |
いも類 | 0.1ppm |
1の表(2R、3aS、5aR、5bS、9S、13S、14R、16aS、16bR)―2―(6―デオキシ―2、3、4―トリ―O―メチル―α―L―マンノピラノシルオキシ)―13―(4―ジメチルアミノ―2、3、4、6―テトラデオキシ―β―D―エリスロピラノシルオキシ)―9―エチル―2、3、3a、5a、5b、6、7、9、10、11、12、13、14、15、16a、16b―ヘキサデカヒドロ―14―メチル―1H―8―オキサシクロドデカ[b]as―インダセン―7、15―ジオン(以下「スピノシンA」という。)及び(2R、3aR、5aS、5bS、9S、13S、14R、16aS、16bR)―2―(6―デオキシ―2、3、4―トリ―O―メチル―α―L―マンノピラノシルオキシ)―13―(4―ジメチルアミノ―2、3、4、6―テトラデオキシ―β―D―エリスロピラノシルオキシ)―9―エチル―2、3、3a、5a、5b、6、7、9、10、11、12、13、14、15、16a、16b―ヘキサデカヒドロ―4、14―ジメチル―1H―8―オキサシクロドデカ[b]as―インダセン―7、15―ジオン(以下「スピノシンD」という。)の混合物(別名スピノサド)の項を次のように改める。
(2R,3aS,5aR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)―2―(6―デオキシ―2,3,4―トリ―O―メチル―α―L―マンノピラノシルオキシ)―13―(4―ジメチルアミノ―2,3,4,6―テトラデオキシ―β―D―エリスロピラノシルオキシ)―9―エチル―2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b―ヘキサデカヒドロ―14―メチル―1H―8―オキサシクロドデカ[b]as―インダセン―7,15―ジオン(以下「スピノシンA」という。)及び(2S,3aR,5aS,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)―2―(6―デオキシ―2,3,4―トリ―O―メチル―α―L―マンノピラノシルオキシ)―13―(4―ジメチルアミノ―2,3,4,6―テトラデオキシ―β―D―エリスロピラノシルオキシ)―9―エチル―2,3,3a,5a,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16a,16b―ヘキサデカヒドロ―4,14―ジメチル―1H―8―オキサシクロドデカ[b]as―インダセン―7,15―ジオン(以下「スピノシンD」という。)の混合物(別名スピノサド) | 第一大粒果実類 | 0.2ppm |
第二大粒果実類 | 0.5ppm | |
小粒果実類 | 1ppm | |
第一果菜類 | 2ppm | |
第二果菜類 | 2ppm | |
第一葉菜類 | 1ppm | |
第二葉菜類 | 5ppm | |
根・茎類 | 0.2ppm | |
茶 | 2ppm |
1の表N―(7―フルオロ―3、4―ジヒドロ―3―オキソ―4―プロプ―2―イニル―2H―1、4―ベンゾキサジン―6―イル)シクロヘキサ―1―エン―1、2―ジカルボキシミド(別名フルミオキサジン)の項を次のように改める。
N―(7―フルオロ―3,4―ジヒドロ―3―オキソ―4―プロプ―2―イニル―2H―1,4―ベンゾキサジン―6―イル)シクロヘキサ―1―エン―1,2―ジカルボキシミド(別名フルミオキサジン) | みかん | 0.1ppm |
みかん以外のかんきつ類 | 0.1ppm | |
第二大粒果実類 | 0.1ppm | |
小粒果実類 | 0.1ppm |
1の表イソプロピル 2―(4―メトキシビフェニル―3―イル)―ヒドラジノホルマート(別名ビフェナゼート)の項を次のように改める。
イソプロピル 2―(4―メトキシビフェニル―3―イル)ヒドラジノホルマート(別名ビフェナゼート) | みかん | 0.2ppm |
みかん以外のかんきつ類 | 1ppm | |
第一大粒果実類 | 0.2ppm | |
第二大粒果実類 | 2ppm | |
小粒果実類 | 3ppm | |
第二果菜類 | 2ppm | |
茶 | 2ppm |
1の表S、S―ジ―sec―ブチル O―エチル ホスホロジチオアート(別名カズサホス)の項を次のように改める。
S,S―ジ―sec―ブチル O―エチル ホスホロジチオアート(別名カズサホス) | 第一大粒果実類 | 0.05ppm |
第二果菜類 | 0.05ppm | |
だいこん類の葉 | 0.05ppm | |
根・茎類 | 0.05ppm | |
いも類 | 0.05ppm |
1の表メチル(E)―メトキシイミノ―{(E)―α―[1―(α、α、α―トリフルオロ―m―トリル)エチリデンアミノオキシ]―o―トリル}―アセタート(別名トリフロキシストロビン)の項の次に次のように加える。
S―4―クロロ―N―イソプロピルカルバニロイルメチル O,O―ジメチル ホスホロジチオアート(別名アニロホス) | 米 | 0.05ppm |
3―(2―クロロ―1,3―チアゾール―5―イルメチル)―5―メチル―1,3,5―オキサジアジナン―4―イリデン(ニトロ)アミン(別名チアメトキサム) | 米 | 0.1ppm |
みかん | 0.5ppm | |
みかん以外のかんきつ類 | 0.5ppm | |
第一大粒果実類 | 0.5ppm | |
第二果菜類 | 0.5ppm | |
いも類 | 0.5ppm | |
2―(2,4―ジクロロ―5―プロプ―2―イニルオキシフェニル)―5,6,7,8―テトラヒドロ―1,2,4―トリアゾロ[4,3―a]ピリジン―3(2H)―オン(別名アザフェニジン) | みかん | 0.1ppm |
みかん以外のかんきつ類 | 0.1ppm | |
N―tert―ブチル―N′―(3―メトキシ―o―トルオイル)―3,5―キシロヒドラジド(別名メトキシフェノジド) | 米 | 0.1ppm |
第二大粒果実類 | 2ppm | |
第一葉菜類 | 1ppm | |
茶 | 5ppm |
2(96)を次のように改める。
(96) 削除
2(288)を次のように改める。
(288) シモキサニル試験法
第1 果実及び野菜の場合
食品、添加物等の規格基準(昭和34年12月厚生省告示第370号)第1 食品の部D 各条の項の○ 穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの2 穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの成分規格の試験法の目に規定するシモキサニルの試験法による。
第2 大豆の場合
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸 酢酸(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
リン酸 リン酸(特級)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
アルミナミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ1710mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シモキサニル標準品 本品は、シモキサニル99%以上を含み、融点は160〜161℃である。
ウ 試験溶液の調製
試料10gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20ml及びリン酸1mlを加えて2時間放置する。これにアセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。ヘキサン及び酢酸エチルの混液(9:1)140mlで展開し、溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
この残留物をアセトニトリル飽和ヘキサン30ml、次いでヘキサン飽和アセトニトリル30mlで100mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についても、ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を200mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(19:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(19:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(17:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、アルミナミニカラムにアセトニトリル5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでアセトニトリル、蒸留水及び酢酸の混液(95:5:0.2)30mlで展開し、溶出液を100mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液(40:10:0.1)を加えて溶かし、2mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)を用い、シモキサニルが15〜20分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長245nmで測定する。
感度 シモキサニルの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
シモキサニル標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液(40:10:0.1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調整し、それぞれを20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってシモキサニルの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりシモキサニルの重量を求め、これに基づき、試料中のシモキサニルの濃度を算出する。
2(325)のイ及びウを次のように改める。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
ガラス繊維ろ紙 化学分析用ガラス繊維ろ紙
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム900mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
C18シリカゲルミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用C18シリカゲル(シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの)1000mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
NH2シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用アミノプロピル(NH2)シリカゲル(シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの)360mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
SCXシリカゲルミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用SCXシリカゲル(シリカゲルにスルホフェニルプロピル基を化学的に結合させたもの)1000mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ピラフルフェンエチル標準品 本品は、ピラフルフェンエチル99%以上を含み、融点は126〜128℃である。
ウ 試験溶液の調製
A法(米、麦・穀類、果実、いも類及びナッツ類の場合)
1) 検体20g相当の試料(米、麦・穀類及びナッツ類の場合は試料10gに水20mlを加えて2時間放置したもの)を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。これをヘキサン100mlで展開し、溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、SCXシリカゲルミニカラムにアセトン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトン10mlで展開し、全溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(9:1)5mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液(3:2)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(19:1)5mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(9:1)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
2) この残留物にアセトンを加えて溶かし、4ml(米、麦・穀類及びナッツ類の場合は2ml)として試験溶液とする。
B法(野菜の場合)
A法の1)と同様の操作を行う。この残留物にアセトニトリル1ml及び蒸留水9mlを加えて溶かす。
あらかじめ、C18シリカゲルミニカラムにアセトニトリル5ml、次いで蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)5mlで展開し、流出液を捨てる。次いでアセトニトリル10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、NH2シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(97:3)5mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液(17:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
以下、A法の2)と同様の操作を行う。
2(342)イ中「1,2ジフェニルカルボノヒドラジド(以下「DPH」という。) DPH(特級)」を「1,5ジフェニルカルボノヒドラジド(以下「DPH」という。) DPH(特級)」に改める。
2(354)の次に次のように加える。
(355) アニロホス試験法
ア 装置 アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
トルエン トルエン(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
メタノール メタノール(特級)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
アニロホス標準品 本品は、アニロホス99.5%以上を含み、融点は50.5〜52.5℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体10gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20mlを加えて2時間放置する。これにメタノール100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)80mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
この残留物をアセトニトリル飽和ヘキサン30ml、次いでヘキサン飽和アセトニトリル30mlで100mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についても、ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を200mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチルの混液(19:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(19:1)10mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液(4:1)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にトルエンを加えて溶かし、1mlとして試験溶液とする。
エ ガスクロマトグラフの操作条件
分離管 内径0.2〜約0.7mm、長さ10〜30mの溶融シリカ製の管の内面に50%フェニルメチルポリシロキサンを0.1〜1.5μmの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。
試料導入部温度 スプリットレス方式の場合は200〜270℃、コールドオンカラム方式の場合は100〜約150℃
分離管槽昇温プログラム 100℃で2分保ち、100〜約280℃の範囲で毎分2〜20℃の昇温を行う。
検出器温度 280〜300℃
ガス流量 キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径0.2〜約0.7mmの分離管に対して線速度を毎秒20〜40cmとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス(高純度窒素ガス又はヘリウムガス)の流量を至適条件になるように調整する。
感度 アニロホスの0.1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
アニロホス標準品の0.05〜1mg/Lトルエン溶液を数点調製し、それぞれを2μlずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってアニロホスの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から2μlを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりアニロホスの重量を求め、これに基づき、検体中のアニロホスの濃度を算出する。
(356) チアメトキサム試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
メタノール メタノール(特級)
ガラス繊維ろ紙 化学分析用ガラス繊維ろ紙
アルミナミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ1710mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
SCXシリカゲルミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用SCXシリカゲル(シリカゲルにスルホフェニルプロピル基を化学的に結合させたもの)1000mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
チアメトキサム標準品 本品は、チアメトキサム99.3%以上を含み、融点は139.1℃である。
N―(2―クロロ―1,3―チアゾール―5―イルメチル)―N′―メチル―N″―ニトロ―グアニジン(以下「グアニジン体」という。)標準品 本品は、グアニジン体99.0%以上を含み、融点は139.1℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料(米の場合は試料20gに水40mlを加えて2時間放置したもの)を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトン及び水の混液(4:1)100ml(米の場合はアセトン80ml)を加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を200mlのメスシリンダーに合わせ、アセトンを加えて200mlとし、その100mlを300mlのナス型フラスコ中に取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。ヘキサン50mlで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル120mlで展開し、この溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に酢酸エチル5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、SCXシリカゲルミニカラムにメタノール5ml及び酢酸エチル5mlを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトン5mlで展開し、流出液を捨てる。次いでメタノール10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、アルミナミニカラムにアセトン10mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトン25mlで展開し、全溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)を加えて溶かし、2ml(米の場合は1ml)として試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 蒸留水及びアセトニトリルの混液(17:3)を用い、チアメトキサム及びグアニジン体がそれぞれ10〜20分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長258nmで測定する。
感度 チアメトキサム及びグアニジン体の各1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
チアメトキサム標準品及びグアニジン体標準品のそれぞれ500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、各溶液を等量ずつ合わせ取り、蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)で希釈して0.04〜0.8mg/L溶液を数点調製し、それぞれ25μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってチアメトキサム及びグアニジン体の検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から25μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりチアメトキサム及びグアニジン体の重量を求める。このチアメトキサムの重量の値とグアニジン体の重量の値に係数1.17を乗じてチアメトキサムの重量に換算したものとを和し、これに基づき、検体中のチアメトキサムの濃度を算出する。
(357) アザフェニジン試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
水酸化カルシウム 水酸化カルシウム(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
無水硫酸ナトリウム 無水硫酸ナトリウム(特級)
液相分離ろ紙 液相分離ろ紙(化学分析用ろ紙をシリコン処理したもの)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
アルミナミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ1710mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ケイ酸マグネシウム カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム910mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
アザフェニジン標準品 本品は、アザフェニジン99.4%以上を含み、融点は168.0〜168.5℃である。
ウ 試験溶液の調製
A法(果実(みかん以外のかんきつ類を除く。)の場合)
1) 検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
2) この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)80mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(9:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(7:3)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。
3) あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(9:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(7:3)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
4) この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、4mlとして試験溶液とする。
B法(みかん以外のかんきつ類)
A法の1)と同様の操作を行った後、この濃縮液にアセトン50ml、蒸留水100ml及び水酸化カルシウム4gを加えて緩やかに振り混ぜた後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。使用したナス型フラスコを蒸留水及びアセトンの混液(2:1)75mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、同様にろ過する。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で150mlまで濃縮する。
この濃縮液を酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)80mlで500mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、有機溶媒層を分取する。残った水層についても、同混液80mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全有機溶媒層を300mlの三角フラスコに合わせ、液相分離ろ紙を用いて500mlのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)20mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
この残留物をアセトニトリル飽和ヘキサン30ml、次いでヘキサン飽和アセトニトリル30mlで100mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についてもヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を200mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(4:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウム5gをヘキサンでクロマト管(内径1.5cm、長さ30cmのガラス管)に充てんし、その上に無水硫酸ナトリウム2gをヘキサンで充てんしておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(4:1)35mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(4:1)80mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。以下、この溶液についてA法の3)と同様の操作を行い、この残留物にアセトニトリル5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、アルミナミニカラムにアセトニトリル5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル20mlで展開し、この溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、2mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液(52:48:0.1)を用い、アザフェニジンが10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長255nmで測定する。
感度 アザフェニジン1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
アザフェニジン標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれを20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってアザフェニジンの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりアザフェニジンの重量を求め、これに基づき、検体中のアザフェニジンの濃度を算出する。
(358) メトキシフェノジド試験法
ア 装置 紫外分光光度検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
トルエン トルエン(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
メタノール メタノール(特級)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
グラファイトカーボンミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム910mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲル カラムクロマトグラフィー用シリカゲル
C18シリカゲル シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
C18シリカゲルミニカラム(1) 内径10mm、長さ13mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用C18シリカゲル500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
C18シリカゲルミニカラム(2) 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用C18シリカゲル2gを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
PSAシリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用PSAシリカゲル(シリカゲルにN′―プロピルエチレンジアミン基を化学的に結合させたもの)500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
メトキシフェノジド標準品 本品は、メトキシフェノジド99.8%以上を含み、融点は204〜206℃である。
ウ 試験溶液の調製
A法(米の場合)
1) 試料10gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20mlを加えて2時間放置する。これにアセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
2) この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。酢酸エチル80mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
3) この残留物をアセトニトリル飽和へキサン30ml、次いでヘキサン飽和アセトニトリル30mlで100mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についても、ヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を200mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン及びヘキサンの混液(1:1)5mlを加えて溶かす。
4) あらかじめ、PSAシリカゲルミニカラムにアセトン及びヘキサンの混液(1:1)5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトン及びヘキサンの混液(1:1)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(49:1)5mlを加えて溶かす。
5) あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(49:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(3:1)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
6) この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、4mlとして試験溶液とする。
B法(果実及び野菜の場合)
1) 検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、アセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。以下、この溶液についてA法の2)と同様の操作を行い、その残留物にアセトン及びヘキサンの混液(1:1)5mlを加えて溶かし、この溶液についてA法の4)及び5)と同様の操作を行う。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液(4:1)5mlを加えて溶かす。
2) あらかじめ、C18シリカゲルミニカラム(1)にメタノール5ml、次いで蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水及びメタノールの混液(4:1)15ml次いで蒸留水及びメタノールの混液(1:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。続いてメタノール及び蒸留水(4:1)10mlで展開し、溶出液を50mlの三角フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
3) この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、8mlとして試験溶液とする。
C法(茶の場合)
試料5gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20mlを加えて2時間放置する。これにアセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトンを加えて200mlとする。この溶液の40mlを200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で2mlに濃縮する。この濃縮液にメタノール20ml及び蒸留水78mlを加える。
あらかじめ、C18シリカゲルミニカラム(2)にメタノール5ml、次いで蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水及びメタノールの混液(3:2)10mlで展開し、流出液を捨てる。次いでメタノール20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン及びヘキサンの混液(1:1)5mlを加えて溶かし、以下、A法の4)と同様の操作を行う。得られた残留物にアセトニトリル及びトルエン(3:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、グラファイトカーボンミニカラムにアセトニトリル及びトルエンの混液(3:1)5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル及びトルエンの混液(3:1)25mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチル(9:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、130℃で4時間加熱活性化したシリカゲル5gをヘキサンでクロマト管(内径1.5cm、長さ30cmのガラス管)に充てんしておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(9:1)50mlで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)80mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液(4:1)5mlを加えて溶かし、以下、この溶液についてB法の2)と同様の操作を行う。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(19:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(19:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(17:3)20mlで展開し、この溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、2mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を用い、メトキシフェノジドが25〜30分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長210nmで測定する。
感度 メトキシフェノジドの0.5ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
メトキシフェノジド標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.025〜0.5mg/L溶液を数点調製し、それぞれを20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってメトキシフェノジドの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりメトキシフェノジドの重量を求め、これに基づき、検体中のメトキシフェノジドの濃度を算出する。