○作物残留に係る農薬登録保留基準を改正する件

〔平成一四・一二・二四環告八三〕

　農薬取締法第三条第二項の規定により定められた同条第一項第四号から第七号までに掲げる場合に該当するかどうかの基準を定める等の件第一号イの環境大臣の定める基準を定める件（昭和四十八年七月環境庁告示第四十六号）の一部を次のように改正し、公布の日から適用する。

　１の表２―クロロエチルホスホン酸（別名エテホン）の項を次のように改める。

　１の表４―［３―（４―クロロフェニル）―３―（３、４―ジメトキシフェニル）アクリロイル］モルホリン（別名ジメトモルフ）の項を次のように改める。

　１の表メチル　（Ｅ）―２―メトキシイミノ―２―［２―（ｏ―トリルオキシメチル）フェニル］アセタート（別名クレソキシムメチル）の項を次のように改める。

　１の表メチル　（Ｅ）―２―［２―［６―（２―シアノフェノキシ）ピリミジン―４―イルオキシ］フェニル］―３―メトキシアクリラート（別名アゾキシストロビン）の項を次のように改める。

　１の表Ｎ―（２、３―ジクロロ―４―ヒドロキシフェニル）―１―メチルシクロヘキサンカルボキサミド（別名フェンヘキサミド）の項を次のように改める。

　１の表アンモニウム　メチルジチオカルバマート（別名メタムアンモニウム塩又はカーバムアンモニウム塩）の項を次のように改める。

　１の表４―クロロ―２―シアノ―Ｎ、Ｎ―ジメチル―５―ｐ―トリルイミダゾール―１―スルホンアミド（別名シアゾファミド）の項を次のように改める。

　１の表３―（２―クロロ―１、３―チアゾール―５―イルメチル）―５―メチル―１、３、５―オキサジアジナン―４―イリデン（ニトロ）アミン（別名チアメトキサム）の項を次のように改める。

　１の表（ＲＳ）―１―メチル―２―ニトロ―３―（テトラヒドロ―３―フリルメチル）グアニジン（別名ジノテフラン）の項を次のように改める。

　１の表メチル　［［２―クロロ―４―フルオロ―５―［（５、６、７、８―テトラヒドロ―３―オキソ―１Ｈ、３Ｈ―［１、３、４］チアジアゾロ［３、４―ａ］ピリダジン―１―イリデン）アミノ］フェニル］チオ］アセタート（別名フルチアセットメチル）の項の次に次のように加える。

　２（１６６）を次のように改める。

　（１６６）　エテホン試験法

ア　装置　アルカリ熱イオン型検出器、高感度窒素・リン検出器又は炎光光度型検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸　酢酸（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ジエチレングリコール　ジエチレングリコール（特級）

　トリメチルシリルジアゾメタン溶液　トリメチルシリルジアゾメタンを約１０％含むヘキサン溶液

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　無水硫酸ナトリウム　無水硫酸ナトリウム（特級）

　硫酸マグネシウム　硫酸マグネシウム（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　エテホン標準品　本品は、エテホン９９％以上を含み、融点は７４〜７５℃である。

ウ　試験溶液の調製

Ａ法（麦・雑穀の場合）

１）　試料２０ｇを３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、塩酸１ｍｌ、酢酸エチル１００ｍｌ、硫酸マグネシウム２０ｇ及び無水硫酸ナトリウム１０ｇを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。

２）　ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻して酢酸エチル５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を合わせ、酢酸エチルを加えて２００ｍｌとする。この溶液の２０ｍｌを２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

　この残留物をアセトニトリル飽和ヘキサン３０ｍｌ及びヘキサン飽和アセトニトリル３０ｍｌで１００ｍｌの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についても、ヘキサン飽和アセトニトリル３０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン及び酢酸の混液（９９：１）１ｍｌを加えて溶かす。

３）　この溶液にトリメチルシリルジアゾメタン溶液１ｍｌを加え、室温で３０分間放置した後、アセトン及びジエチレングリコールの混液（９９：１）１ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

４）　この残留物に酢酸エチル及びヘキサンの混液（１：１）５ｍｌを加えて溶かす。あらかじめ、シリカゲルミニカラムに酢酸エチル５ｍｌ及びヘキサン５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、酢酸エチル及びヘキサンの混液（１：１）５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びヘキサンの混液（４：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、アセトン及びジエチレングリコールの混液（９９：１）１ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトンを加えて溶かし、４ｍｌとして試験溶液とする。

Ｂ法（果実及び野菜の場合）

　検体に対してその２０ｇ当たり塩酸１ｍｌを加えて磨砕均一化したものを試料とする。検体２０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、酢酸エチル１００ｍｌ、硫酸マグネシウム２０ｇ及び無水硫酸ナトリウム６０ｇを加え、振とう機を用いて１０分間激しく振とう後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。以下、この残留物についてＡ法の２）、３）及び４）と同様の操作を行う。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面に５％フェニルメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　炎光光度型検出器のフィルター　リン用干渉フィルター（波長５２６ｎｍ）を用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜１００℃

　分離管槽昇温プログラム　５０℃で２分保ち、５０〜約２８０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　エテホンの０．０２ｎｇから誘導されるＯ，Ｏ―ジメチル―２―クロロエチル　ホスホナートの相当量が十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　エテホン標準品の１００ｍｇ／Ｌアセトン溶液を調製し、その１ｍｌを１００ｍｌの三角フラスコに取り、酢酸０．０１ｍｌを加える。この溶液についてウのＡ法の３）と同様の操作を行い、その残留物にアセトンを加えて溶かし、５０ｍｌとする。この溶液をアセトンで希釈して０．０１〜０．２ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってエテホンの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりエテホンの重量を求め、これに基づき、検体中のエテホンの濃度を算出する。

　２（２９６）を次のように改める。

　（２９６）　ジメトモルフ試験法

　食品、添加物等の規格基準（昭和３４年１２月厚生省告示第３７０号）第１　食品の部Ｄ　各条の項の○　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの２　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの成分規格の試験法の目に規定するジメトモルフの試験法による。

　２（３３６）イ及びウを次のように改める。

イ　試薬試液

　亜硫酸ナトリウム　亜硫酸ナトリウム（特級）

　塩化カルシウム　塩化カルシウム（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　シリコン　消泡用シリコン

　次亜塩素酸ナトリウム溶液　有効塩素５％以上を含む次亜塩素酸ナトリウム溶液を蒸留水で用時１００倍に希釈したもの

　水酸化ナトリウム　水酸化ナトリウム（特級）

　液相分離ろ紙　液相分離ろ紙（化学分析用ろ紙をシリコン処理したもの）

　メチルイソチオシアネート標準品　本品は、メチルイソチオシアネート９７．０％以上を含み、融点は３５〜３６℃である。

ウ　試験溶液の調製

　細切した検体２０ｇ相当の試料を蒸留装置の丸底フラスコに量り取り、蒸留水３００ｍｌ、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウム溶液２０ｍｌ、０．１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液２０ｍｌ、次亜塩素酸ナトリウム溶液１０ｍｌ、１％亜硫酸ナトリウム溶液２ｍｌ、シリコン約０．２ｍｌ及び酢酸エチル１０ｍｌを加え、４０分間加熱還流する。終了後、トラップ（別図の�@）の部分の水及び酢酸エチルを別の丸底フラスコに取り、これに蒸留水３００ｍｌを加え蒸留装置に取りつけ、４０分間加熱還流する。

　終了後、トラップ（別図の�@）の部分の水及び酢酸エチルを１００ｍｌの分液漏斗に取り、蒸留水１０ｍｌでトラップを洗い、その洗液を分液漏斗に合わせる。これに塩化ナトリウム１０ｇを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、酢酸エチル層を分取し、液相分離ろ紙を用いてろ過し試験溶液とする。

　２（３３６）エ中「メチルイソチオシアネートの０．０３ｎｇ」を「メチルイソチオシアネートの０．０１ｎｇ」に改め、２（３３６）オ中「メチルイソチオシアネート標準品の０．０１５〜０．３ｍｇ／Ｌ酢酸エチル溶液」を「メチルイソチオシアネート標準品の０．００５〜０．１ｍｇ／Ｌ酢酸エチル溶液」に改める。

　２（３４９）ウ中「検体２０ｇ相当の試料」を「検体２０ｇ相当の試料（麦・雑穀の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）」に、「４ｍｌとして試験溶液とする。」を「４ｍｌ（麦・雑穀の場合は２ｍｌ）として試験溶液とする。」に改める。

　２（３５６）ウ中「検体２０ｇ相当の試料（米の場合は試料２０ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの、茶の場合は試料４ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン及び水の混液（４：１）１００ｍｌ（米の場合はアセトン８０ｍｌ、茶の場合はアセトン６０ｍｌ）」を「検体２０ｇ相当の試料（米及び豆類の場合は試料２０ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの、茶の場合は試料４ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン及び水の混液（４：１）１００ｍｌ（米、豆類及び茶の場合はアセトン８０ｍｌ）」に、「２ｍｌ（米及びてんさいの場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。」を「２ｍｌ（米、豆類及び茶の場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。」に改める。

　２（３６４）ウ中「Ａ法（米、果実及び野菜（だいこんの根及び葉を除く。）の場合）」を「Ａ法（米、果実及び野菜（ねぎ、だいこんの根及び葉を除く。）の場合」に改め、２（３６４）ウＡ法１）中「すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。」を「すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で１５ｍｌに濃縮する。」に、「この濃縮液に塩化ナトリウム５．５ｇを加えて溶かし、」を「この濃縮液に塩化ナトリウム５ｇを加えて溶かし、」に改め、２（３６４）ウＡ法２）中「この残留物に酢酸エチル５ｍｌを加えて溶かす。」を「この残留物に蒸留水５ｍｌを加えて溶かす。」に改め、２（３６４）ウＢ法を次のように改める。

Ｂ法（茶、ねぎ、だいこんの根及び葉の場合）

　検体２０ｇ相当の試料（茶の場合は試料５ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で１５ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液に塩化ナトリウム５ｇを加えて溶かし、多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン５０ｍｌで展開し、流出液を捨てた後、酢酸エチル１００ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に酢酸エチル５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムに酢酸エチル５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、酢酸エチル１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びメタノールの混液（９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。以下、この残留物についてＡ法の２）と同様の操作を行う。

　２（３６５）の次に次のように加える。

　（３６６）　メタミトロン試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　ガラス繊維ろ紙　化学分析用ガラス繊維ろ紙

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ１５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　メタミトロン標準品　本品は、メタミトロン９８％以上を含み、融点は１６７℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これに１ｍｏｌ／Ｌ塩酸１ｍｌ及びアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコ中に合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン５０ｍｌで展開し、この流出液を捨てる。次いで酢酸エチル１２０ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチルの混液（４：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムに酢酸エチル５ｍｌ及びヘキサン５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液（４：１）５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びヘキサンの混液（３：２）２０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

　この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）を加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）を用い、メタミトロンが１０〜１５分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長３１０ｎｍで測定する。

　感度　メタミトロンの１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　メタミトロン標準品の５００ｍｇ／Ｌアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びアセトニトリルの混液（４：１）で希釈して０．０５〜１．０ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを２０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってメタミトロンの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりメタミトロンの重量を求め、これに基づき、検体中のメタミトロンの濃度を算出する。

　（３６７）　シフルフェナミド試験法

ア　装置　電子捕獲型検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトン、酢酸エチル、ヘキサン及びメタノール　それぞれ３００ｍｌをすり合わせ減圧濃縮器を用いて５ｍｌに濃縮し、その５μｌをガスクロマトグラフに注入したとき、ガスクロマトグラム上の当該物質が示すピーク以外のピークの高さが２×１０^-１１ｇのγ―ＢＨＣが示すピークの高さ以下であるもの

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　グラファイトカーボンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径９ｍｍ、長さ６０ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）３６０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　シフルフェナミド標準品　本品は、シフルフェナミド９８％以上を含み、融点は６１．５〜６２．５℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（麦・雑穀の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、メタノール１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１００ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサンを加えて溶かし、１０ｍｌとする。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これに上記の溶液５ｍｌを流し入れ、ヘキサン５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液（１９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にメタノール５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、グラファイトカーボンミニカラムにメタノール５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、メタノール１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサンを加えて溶かし、１０ｍｌ（麦・雑穀の場合は５ｍｌ）として試験溶液とする。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面に５０％フェニルメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜１００℃

　分離管槽昇温プログラム　１００℃で２分保ち、１００〜約２７０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、追加ガス（高純度窒素ガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　シフルフェナミドの０．０１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　シフルフェナミド標準品の０．００５〜０．１ｍｇ／Ｌヘキサン溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってシフルフェナミドの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりシフルフェナミドの重量を求め、これに基づき、検体中のシフルフェナミドの濃度を算出する。

　（３６８）　ピリフタリド試験法

ア　装置　アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフ並びにカラムスイッチングシステム及び紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ（別図）を用いる。

イ　試薬試液

　アセトン　アセトン（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　シリコン　消泡用シリコン

　トルエン　トルエン（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　リン酸水素二カリウム　リン酸水素二カリウム（特級）

　リン酸二水素カリウム　リン酸二水素カリウム（特級）

　ガラス繊維ろ紙　化学分析用ガラス繊維ろ紙

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　Ｃ_１８シリカゲルミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用Ｃ_１８シリカゲル（シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの）１０００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径９ｍｍ、長さ６０ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　０．０７ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝溶液　０．０７ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二カリウム溶液に０．０７ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素カリウム溶液を加えてｐＨを７に調整したもの

　ピリフタリド標準品　本品は、ピリフタリド９９．６％以上を含み、融点は１６３．４℃である。

　７―メタンスルフィニル―３―メチル―３Ｈ―イソベンゾフラン―１―オン（以下「脱ピリミジン体」という。）標準品　本品は、脱ピリミジン体９９％以上を含み、融点は１４０℃である。

ウ　試験溶液の調製

　試料１０ｇを３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、０．０７ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液２０ｍｌを加えて２時間放置する。これにメタノール８０ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール及び０．０７ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液の混液（４：１）５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、シリコン０．１ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１４０ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、これをピリフタリド溶出液とする。続いて酢酸エチル及びヘキサンの混液（１：１）１２０ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、これを脱ピリミジン体溶出液とする。

　ピリフタリド溶出液をすり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（４９：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン及びアセトンの混液（４９：１）５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（４９：１）１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液（１７：３）５ｍｌで展開し、この溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にトルエンを加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

　脱ピリミジン体溶出液をすり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（１７：３）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン及びアセトンの混液（１７：３）５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（１７：３）５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液（７：３）２０ｍｌで展開し、この溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、Ｃ_１８シリカゲルミニカラムにメタノール５ｍｌ、次いで蒸留水５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで蒸留水及びメタノールの混液（７：３）２０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌの三角フラスコに取る。

　この溶液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。酢酸エチル１００ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液（１７：３）２０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液（４：１）を加えて溶かし、１ｍｌとして試験溶液とする。

エ　測定機器の操作条件

　�T　ピリフタリドの測定機器の操作条件

　装置　アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面にメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜１００℃

　分離管槽昇温プログラム　１００℃で２分保ち、１００〜約２８０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　ピリフタリドの０．０５ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

　�U　脱ピリミジン体の測定機器の操作条件

　装置　カラムスイッチングシステム及び紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

　分離管�@　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管にシリカゲルにフェニル基を化学的に結合させたものを充てんして用いる。

　分離管�A　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管にシリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを充てんして用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液�@　蒸留水及びメタノールの混液（３：１）を用い、脱ピリミジン体が分離管�@を１２．５〜１４分で流出するように流速を調整する。

　溶離液�A　蒸留水及びメタノールの混液（３：１）を用い、脱ピリミジン体が分離管�Aを１７．５〜２１分で流出するように流速を調整する。なお、溶離液�@の流速と溶離液�Aの流速は同一とする。

　カラムスイッチングシステム　注入から脱ピリミジン体が分離管�@を流出する直前まで分離管�@及び分離管�Aに別々に溶離液を流し、脱ピリミジン体が分離管�@から流出している間は、分離管�@と分離管�Aを連結した状態で溶離液を流す。脱ピリミジン体が分離管�@から流出を終了した以降は分離管�@及び分離管�Aに別々に溶離液を流す。

　検出器　波長２２５ｎｍで測定する。

　感度　脱ピリミジン体の１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　�T　ピリフタリド

　ピリフタリド標準品の０．０２５〜０．５ｍｇ／Ｌトルエン溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってピリフタリドの検量線を作成する。

　�U　脱ピリミジン体

　脱ピリミジン体標準品の５００ｍｇ／Ｌメタノール溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びメタノールの混液（４：１）で希釈して０．０２５〜０．５ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを４０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク面積（３１分から３４分にかけて検出される２本のピークの合計値）、横軸に重量を取って脱ピリミジン体の検量線を作成する。

カ　定量試験

　ピリフタリドの試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりピリフタリドの重量を求め、これに基づき、検体中のピリフタリドの濃度を算出する。

　また、脱ピリミジン体の試験溶液から４０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線により脱ピリミジン体の重量を求め、これに基づき検体中の脱ピリミジン体の濃度を算出する。

　このピリフタリドの濃度の値及び脱ピリミジン体の濃度の値に係数１．５１を乗じてピリフタリドの濃度に換算したものを和し、検体中のピリフタリドの濃度を算出する。

（別図）高速液体クロマトグラフ（カラムスイッチングシステム）流路図



手順１　試料注入時から目的物質が分離管�@から溶出する直前まで

手順３　目的物質が分離管�@から溶出を終了した後



手順２　目的物質が分離管�@から溶出している間

　（３６９）　シメコナゾール試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　アンモニア水　アンモニア水（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸　酢酸（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ジエチレングリコール　ジエチレングリコール（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径９ｍｍ、長さ６０ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＳＣＸシリカゲルミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＳＣＸシリカゲル（シリカゲルにスルホフェニルプロピル基を化学的に結合させたもの）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ポリスチレンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用スチレンジビニルベンゼン共重合体（ポリスチレン系ゲル、粒径８０〜１６０μｍ）５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　２―（４―フルオロフェニル）―３―１Ｈ―１，２，４―トリアゾール―１―イル）プロペン（以下「脱シロキサン体」という。）標準品　本品は、脱シロキサン体９８％以上を含み、融点は３８〜３９℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（米及び豆類の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの、茶の場合は試料５ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル及び水の混液（４：１）５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトニトリルを加えて２００ｍｌとする。この溶液の１００ｍｌを３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。この濃縮液を酢酸エチル及びヘキサンの混液（１：１）５０ｍｌ、次いで蒸留水１０ｍｌで３００ｍｌの分液漏斗に洗い入れ、これに塩化ナトリウム６ｇを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、有機溶媒層を分取する。残った水層についても同混液５０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全有機溶媒層を３００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを同混液２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、この洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチルの混液（１９：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液（１９：１）１５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液（７：３）３０ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に７％酢酸１５ｍｌ及び１ｍｏｌ／Ｌ塩酸１５ｍｌを加え、栓をして時々振り混ぜながら６０℃で３時間放置する。

　あらかじめ、ポリスチレンミニカラムにメタノール５ｍｌ、次いで蒸留水５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水１０ｍｌで展開し、流出液を捨てた後、約１分間吸引を続け水分を除去する。

ポリスチレンミニカラムの下にＳＣＸシリカゲルミニカラム（あらかじめ、メタノール５ｍｌを流し入れ、洗浄したもの）を連結し、メタノール１０ｍｌで展開し、流出液を捨てた後、ポリスチレンミニカラムを分離する。ＳＣＸシリカゲルミニカラムにメタノール―アンモニア水（９９：１）１０ｍｌを流し入れて展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、２％ジエチレングリコールアセトン溶液０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液（７：３）を加えて溶かし、２ｍｌ（米、豆類及び茶の場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水及びアセトニトリルの混液（７：３）を用い、脱シロキサン体が１０〜１５分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２４０ｎｍで測定する。

　感度　脱シロキサン体の１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　脱シロキサン体標準品の５００ｍｇ／Ｌアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びアセトニトリルの混液（７：３）で希釈して０．０２５〜０．５ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを４０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取って脱シロキサン体の検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から４０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線により脱シロキサン体の重量を求め、これに係数１．４４を乗じてシメコナゾール重量に換算し、これに基づき、検体中のシメコナゾールの濃度を算出する。