〔平成一四・八・二九・環告五八〕
農薬取締法第三条第二項の規定により定められた同条第一項第四号から第七号までに掲げる場合に該当するかどうかの基準を定める等の件第四号の環境大臣の定める基準を定める件（平成五年四月環境庁告示第三十五号）の一部を次のように改正し、公布の日から適用する。
１の表（Ｅ）―２―メトキシイミノ―Ｎ―メチル―２―（２―フェノキシフェニル）アセトアミド（別名メトミノストロビン）の項の次に次のように加える。
| （２Ｒ，３ａＳ，５ａＲ，５ｂＳ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ，１６ａＳ，１６ｂＲ）―２―（６―デオキシ―２，３，４―トリ―Ｏ―メチル―α―Ｌ―マンノピラノシルオキシ）―１３―（４―ジメチルアミノ―２，３，４，６―テトラデオキシ―β―Ｄ―エリスロピラノシルオキシ）―９―エチル―２，３，３ａ，５ａ，５ｂ，６，７，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６ａ，１６ｂ―ヘキサデカヒドロ―１４―メチル―１Ｈ―８―オキサシクロドデカ［ｂ］ａｓ―インダセン―７，１５―ジオン（以下「スピノシンＡ」という。）及び（２Ｓ，３ａＲ，５ａＳ，５ｂＳ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ，１６ａＳ，１６ｂＲ）―２―（６―デオキシ―２，３，４―トリ―Ｏ―メチル―α―Ｌ―マンノピラノシルオキシ）―１３―（４―ジメチルアミノ―２，３，４，６―テトラデオキシ―β―Ｄ―エリスロピラノシルオキシ）―９―エチル―２，３，３ａ，５ａ，５ｂ，６，７，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６ａ，１６ｂ―ヘキサデカヒドロ―４，１４―ジメチル―１Ｈ―８―オキサシクロドデカ［ｂ］ａｓ―インダセン―７，１５―ジオン（以下「スピノシンＤ」という。）の混合物（別名スピノサド） | ０．６ｍｇ／Ｌ |
２（１２９）の次に次のように加える。
（１３０）スピノサド試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル（特級）
塩化ナトリウム 塩化ナトリウム（特級）
酢酸アンモニウム 酢酸アンモニウム（特級）
酢酸エチル 酢酸エチル（特級）
トリエチルアミン トリエチルアミン（特級）
メタノール メタノール（特級）
無水硫酸ナトリウム 無水硫酸ナトリウム（特級）
ＣＨシリカゲルミニカラム 内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＣＨシリカゲル（シリカゲルにシクロヘキシルシランを化学的に結合させたもの）１０００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
スピノシンＡ標準品 本品は、スピノシンＡ９０％以上を含み、融点は８４〜９９．５℃である。
スピノシンＢ標準品 本品は、スピノシンＢ９０％以上を含み、融点は７５℃である。
スピノシンＤ標準品 本品は、スピノシンＤ９０％以上を含み、融点は１６１．５〜１７０℃である。
ウ 試験溶液の調製
Ａ法 溶媒抽出法
１） 試料１００ｍｌを３００ｍｌの分液漏斗に量り取り、塩化ナトリウム１０ｇ及び酢酸エチル５０ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、酢酸エチル層を分取する。残った水層についても、酢酸エチル５０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全酢酸エチル層を３００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを酢酸エチル２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。
２） この残留物に蒸留水、アセトニトリル及びメタノールの混液（３：１：１）１０ｍｌを加えて溶かす。あらかじめ、ＣＨシリカゲルミニカラムにメタノール５ｍｌ及び蒸留水５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでアセトニトリル及びトリエチルアミンの混液（４９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。
３） この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液（１：１）を加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。
Ｂ法 固相抽出法
試料１００ｍｌを、あらかじめアセトニトリル５ｍｌ及び蒸留水５ｍｌを順に流し入れ洗浄したＣＨシリカゲルミニカラムに毎分１０〜２０ｍｌの流速で流し入れ、次いでアセトニトリル１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。アセトニトリル及びトリエチルアミンの混液（４９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。以下、この残留物についてＡ法の３）と同様の操作を行う。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 ４０℃
溶離液 アセトニトリル、メタノール及び２％酢酸アンモニウムの混液（２：２：１）を用い、スピノシンＡ、スピノシンＢ及びスピノシンＤがそれぞれ１０〜２０分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長２５０ｎｍで測定する。
感度 スピノシンＡ、スピノシンＢ及びスピノシンＤのそれぞれ４ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
スピノシンＡ標準品、スピノシンＢ標準品及びスピノシンＤ標準品をそれぞれアセトニトリルに溶解し、各溶液を等量ずつ合わせ取ったものをアセトニトリル及び蒸留水の混液（１：１）で希釈し、スピノシンＡ、スピノシンＢ及びスピノシンＤの０．１〜２ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを４０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってスピノシンＡ、スピノシンＢ及びスピノシンＤの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から４０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりスピノシンＡ、スピノシンＢ及びスピノシンＤの重量を求める。このスピノシンＡ及びスピノシンＤの重量の値とスピノシンＢの重量の値に係数１．０２を乗じてスピノシンＡの重量に換算したものとを合計し、これに基づき、試料中のスピノサドの濃度を算出する。