○作物残留に係る農薬登録保留基準を改正する件

〔平成一四・八・二九・環告五七〕

　農薬取締法第三条第二項の規定により定められた同条第一項第四号から第七号までに掲げる場合に該当するかどうかの基準を定める等の件第一号イの環境大臣の定める基準を定める件（昭和四十八年七月環境庁告示第四十六号）の一部を次のように改正し、公布の日から適用する。

　１の表２、３―ジシアノ―１、４―ジチアアントラキノン（別名ジチアノン）の項を次のように改める。

　１の表１―［４―（２―クロロ―α、α、α―トリフルオロ―ｐ―トリルオキシ）―２―フルオロフェニル］―３―（２、６―ジフルオロベンゾイル）尿素（別名フルフェノクスロン）の項を次のように改める。

　１の表１―（２―シアノ―２―メトキシイミノアセチル）―３―エチル尿素（別名シモキサニル）の項を次のように改める。

　１の表（２Ｒ、３ａＳ、５ａＲ、５ｂＳ、９Ｓ、１３Ｓ、１４Ｒ、１６ａＳ、１６ｂＲ）―２―（６―デオキシ―２、３、４―トリ―Ｏ―メチル―α―Ｌ―マンノピラノシルオキシ）―１３―（４―ジメチルアミノ―２、３、４、６―テトラデオキシ―β―Ｄ―エリスロピラノシルオキシ）―９―エチル―２、３、３ａ、５ａ、５ｂ、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６ａ、１６ｂ―ヘキサデカヒドロ―１４―メチル―１Ｈ―８―オキサシクロドデカ［ｂ］ａｓ―インダセン―７、１５―ジオン（以下「スピノシンＡ」という。）及び（２Ｓ、３ａＲ、５ａＳ、５ｂＳ、９Ｓ、１３Ｓ、１４Ｒ、１６ａＳ、１６ｂＲ）―２―（６―デオキシ―２、３、４―トリ―Ｏ―メチル―α―Ｌ―マンノピラノシルオキシ）―１３―（４―ジメチルアミノ―２、３、４、６―テトラデオキシ―β―Ｄ―エリスロピラノシルオキシ）―９―エチル―２、３、３ａ、５ａ、５ｂ、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６ａ、１６ｂ―ヘキサデカヒドロ―４、１４―ジメチル―１Ｈ―８―オキサシクロドデカ［ｂ］ａｓ―インダセン―７、１５―ジオン（以下「スピノシンＤ」という。）の混合物（別名スピノサド）の項を次のように改める。

　１の表カルシウム　３―オキシド―５―オキソ―４―プロピオニル―３―シクロヘキセンカルボキシラート（別名プロヘキサジオンカルシウム塩）の項を次のように改める。

　１の表２′―ｔｅｒｔ―ブチル―５―メチル―２′―（３、５―キシロイル）クロマン―６―カルボヒドラジド（別名クロマフェノジド）の項を次のように改める。

　１の表（ＲＳ）―１―ｐ―クロロフェニル―４、４―ジメチル―３―（１Ｈ―１、２、４―トリアゾール―１―イルメチル）ペンタン―３―オール（別名テブコナゾール）の項を次のように改める。

　１の表メチル（ＲＳ）―７―クロロ―２、３、４ａ、５―テトラヒドロ―２―［メトキシカルボニル（４―トリフルオロメトキシフェニル）カルバモイル］インデノ［１、２―ｅ］［１、３、４］オキサジアジン―４ａ―カルボキシラート（別名インドキサカルブＭＰ）の項を次のように改める。

　１の表メチル（Ｅ）―メトキシイミノ―｛（Ｅ）―α―［１―（α、α、α―トリフルオロ―ｍ―トリル）エチリデンアミノオキシ］―ｏ―トリル｝―アセタート（別名トリフロキシストロビン）の項を次のように改める。

　１の表３―（２―クロロ―１、３―チアゾール―５―イルメチル）―５―メチル―１、３、５―オキサジアジナン―４―イリデン（ニトロ）アミン（別名チアメトキサム）の項を次のように改める。

　１の表（ＲＳ）―エチル　２―クロロ―３―［２―クロロ―５―（４―ジフルオロメチル―４、５―ジヒドロ―３―メチル―５―オキソ―１Ｈ―１、２、４―トリアゾール―１―イル）―４―フルオロフェニル］プロピオナート（別名カルフェントラゾンエチル）の項を次のように改める。

　１の表（ＲＳ）―１―メチル―２―ニトロ―３―（テトラヒドロ―３―フリルメチル）グアニジン（別名ジノテフラン）の項の次に次のように加える。

　２（６７）を次のように改める。

　（６７）　ジチアノン試験法

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトン　アセトン（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸　酢酸（特級）

　ジエチルエーテル　ジエチルエーテル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　無水硫酸ナトリウム　無水硫酸ナトリウム（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　シリカゲル　カラムクロマトグラフィー用シリカゲル

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ジチアノン標準品　本品は、ジチアノン９９．４％以上を含み、融点は２１６℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体に対し、その５００ｇ当たり４ｍｏｌ／Ｌ塩酸５０ｍｌを加えて磨砕均一化したものを試料とする。検体２０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、アセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトンを加えて２００ｍｌとし、その５０ｍｌを３００ｍｌの分液漏斗に取り、これに５％塩化ナトリウム溶液１００ｍｌ及びヘキサン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、ヘキサン層を分取する。残った水層についてもヘキサン５０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全ヘキサン層を３００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコをヘキサン２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、酢酸０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン１５ｍｌ次いでヘキサン及びアセトンの混液（４９：１）１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。続いてヘキサン及びアセトンの混液（９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、酢酸０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びジエチルエーテルの混液（１７：３）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、１３０℃で４時間加熱して活性化した後、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸を５％含ませたシリカゲル５ｇをヘキサンでクロマト管（内径１．５ｃｍ、長さ３０ｃｍのガラス管）に充てんし、その上に無水硫酸ナトリウム２ｇをヘキサンで充てんしておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液（１７：３）４０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液（７：３）８０ｍｌで展開し、溶出液を２００ｍｌのナス型フラスコに取り、酢酸０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に５％酢酸含有メタノールを加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　メタノール、蒸留水及び酢酸の混液（６５：３５：１）を用い、ジチアノンが７〜１２分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２５５ｎｍで測定する。

　感度　ジチアノンの１ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　ジチアノン標準品の２００ｍｇ／Ｌジクロロメタン溶液を調製する。この溶液を５％酢酸含有メタノールで希釈して０．１〜２ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれを１０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってジチアノンの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から１０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりジチアノンの重量を求め、これに基づき、検体中のジチアノンの濃度を算出する。

　２（２８８）第２中「大豆の場合」を「鱗茎類及び大豆の場合」に改め、ウ中「試料１０ｇを３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、水２０ｍｌ及びリン酸１ｍｌを加えて２時間放置する。これにアセトン１００ｍｌを加え、」を「検体に対し、その５００ｇ当たりリン酸５０ｇ加えて磨砕均一化したものを試料とし、その検体２０ｇ相当の試料（大豆の場合は、試料１０ｇに水２０ｍｌ及びリン酸１ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、」に、「２ｍｌとして試験溶液とする。」を「４ｍｌ（大豆の場合は２ｍｌ）として試験溶液とする。」に改める。

　２（３２７）第１中「果実（いちごを除く。）、野菜及び茶の場合」を「米、果実（いちごを除く。）及び野菜の場合」に改める。

　２（３３２）を次のように改める。

　（３３２）　プロヘキサジオンカルシウム塩試験法

第１　穀類の場合

　食品、添加物等の規格基準（昭和３４年１２月厚生省告示第３７０号）第１　食品の部Ｄ　各条の項の○　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの２　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの成分規格の試験法の目に規定するプロヘキサジオンカルシウム塩の試験法による。

第２　果実及び野菜の場合

ア　装置　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸　酢酸（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　炭酸水素ナトリウム　炭酸水素ナトリウム（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　硫酸　硫酸（特級）

　ガラス繊維ろ紙　化学分析用ガラス繊維ろ紙

　Ｃ_１８シリカゲルミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用Ｃ_１８シリカゲル（シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの）１０００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　プロヘキサジオン標準品　本品は、プロヘキサジオン９９％以上を含み、融点は１２３〜１２５℃である。

ウ　試験溶液の調製

１）　検体１０ｇ相当の試料を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これに１ｍｏｌ／Ｌ硫酸１０ｍｌ及びアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を蒸留水５０ｍｌ及びヘキサン５０ｍｌで２００ｍｌの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、水層を分取する。この水層にヘキサン及び酢酸エチルの混液（７：３）５０ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、有機溶媒層を分取する。残った水層についても、同混液５０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を２回繰り返す。全有機溶媒層を２００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを同混液３０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物に１％炭酸水素ナトリウム溶液５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、Ｃ_１８シリカゲルミニカラムにメタノール５ｍｌ、次いで１％炭酸水素ナトリウム溶液５ｍｌを順に流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、１％炭酸水素ナトリウム溶液１５ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌの分液漏斗に取る。これに蒸留水１０ｍｌ、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸３ｍｌ及び酢酸エチル３０ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、酢酸エチル層を分取する。残った水層についても、酢酸エチル３０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全酢酸エチル層を１００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム１０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、１００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを酢酸エチル２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

２）　この残留物にメタノール４ｍｌ及び硫酸０．０５ｍｌを加え、室温で１２時間放置する。この溶液を２％炭酸水素ナトリウム溶液３０ｍｌ及びヘキサン３０ｍｌで１００ｍｌの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、水層を分取する。この水層に４ｍｏｌ／Ｌ塩酸５ｍｌ及びヘキサン３０ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、ヘキサン層を分取する。残った水層についても、ヘキサン３０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を２回繰り返す。全ヘキサン層を２００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコをヘキサン２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

３）　この残留物に蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液（７０：３０：０．５）を加えて溶かし、１ｍｌとして試験溶液とする。

エ　高速液体クロマトグラフの操作条件

　充てん剤　シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。

　分離管　内径２〜６ｍｍ、長さ１５〜３０ｃｍのステンレス管を用いる。

　分離管槽温度　４０℃

　溶離液　蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液（７０：３０：０．５）を用い、メチル―３，５―ジオキソ―４―プロピオニルシクロヘキセンカルボキシラートが約１０分で流出するように流速を調整する。

　検出器　波長２７５ｎｍで測定する。

　感度　プロヘキサジオンの１ｎｇから誘導されるメチル―３，５―ジオキソ―４―プロピオニルシクロヘキセンカルボキシラートが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　プロヘキサジオン標準品の５０ｍｇ／Ｌアセトニトリル溶液を調製し、この１ｍｌを１００ｍｌのナス型フラスコに取り、室温で窒素ガスを通じて溶媒を留去する。以下、この残留物についてウの２）と同様の操作を行い、残留物をアセトニトリルに溶かし１０ｍｌとする。この溶液を蒸留水、アセトニトリル及び酢酸の混液（７０：３０：０．５）で希釈し、０．１〜２ｍｇ／Ｌ溶液を数点調製し、それぞれ１０μｌずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってプロヘキサジオンの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から１０μｌを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりプロヘキサジオンの重量を求め、これに換算係数１．１８を乗じてプロヘキサジオンカルシウム塩の重量に換算し、これに基づき、検体中のプロヘキサジオンカルシウム塩の濃度を算出する。

　２（３４５）を次のように改める。

　（３４５）　テブコナゾール試験法

　食品、添加物等の規格基準（昭和３４年１２月厚生省告示第３７０号）第１　食品の部Ｄ　各条の項の○　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの２　穀類、豆類、果実、野菜、種実類、茶及びホップの成分規格の試験法の目に規定するテブコナゾールの試験法による。ただし、茶の場合における試験溶液の調製については、４．試験溶液の調製中「�A果実、野菜及び抹茶の場合」の方法によるものとする。

　２（３５３）ウ中「検体２０ｇ相当の試料」を「検体２０ｇ相当の試料（豆類の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）」に改める。

　２（３５４）イ及びウを次のように改める。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　ジエチルエーテル　ジエチルエーテル（特級）

　ジエチレングリコール　ジエチレングリコール（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　液相分離ろ紙　液相分離ろ紙（化学分析用ろ紙をシリコン処理したもの）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　グラファイトカーボンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ１３ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）３６０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　トリフロキシストロビン標準品　本品は、トリフロキシストロビン９９．０％以上を含み、融点は７２〜７３℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（茶の場合は試料５ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトンを加えて２００ｍｌとし、その５０ｍｌ（茶の場合、その４０ｍｌ）を３００ｍｌの分液漏斗に取る。これに５％塩化ナトリウム溶液１００ｍｌ、リン酸２ｍｌ次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液（９：１）５０ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、有機溶媒層を分取する。残った水層についても、同混液５０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全有機溶媒層を３００ｍｌの三角フラスコに合わせ、液相分離ろ紙を用いて３００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを同混液３０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、２％ジエチレングリコールアセトン溶液０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトン５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、グラファイトカーボンミニカラムにアセトン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトン１５ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、２％ジエチレングリコールアセトン溶液０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にジエチルエーテル１ｍｌを加えて溶かし、ヘキサン９ｍｌを加える。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液（９：１）２０ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、２％ジエチレングリコールアセトン溶液０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン２０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液（１９：１）３０ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、２％ジエチレングリコールアセトン溶液０．５ｍｌを加え、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液（１：１）を加えて溶かし、２ｍｌとしてトリフロキシストロビンの試験溶液とする。

　２（３５６）ウ中「検体２０ｇ相当の試料（米の場合は試料２０ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの）」を「検体２０ｇ相当の試料（米の場合は試料２０ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの、茶の場合は試料４ｇに水４０ｍｌを加えて２時間放置したもの）」に、「アセトン及び水の混液（４：１）１００ｍｌ（米の場合はアセトン８０ｍｌ）」を「アセトン及び水の混液（４：１）１００ｍｌ（米の場合はアセトン８０ｍｌ、茶の場合はアセトン６０ｍｌ）」に、「全ろ液を２００ｍｌのメスシリンダーに合わせ、アセトンを加えて２００ｍｌとし、その１００ｍｌを３００ｍｌのナス型フラスコ中に取り、」を「全ろ液にアセトンを加えて２００ｍｌとし、その１００ｍｌ（茶の場合は２５ｍｌに水１５ｍｌを加えたもの）を３００ｍｌのナス型フラスコ中に取り、」に、「２ｍｌ（米の場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。」を「２ｍｌ（米及びてんさいの場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。」に改める。

　２（３６１）イ及びウを以下のように改める。

イ　試薬試液

　アセトン　アセトン（特級）

　塩酸　塩酸（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　酢酸ナトリウム　酢酸ナトリウム（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　ガラス繊維ろ紙　化学分析用ガラス繊維ろ紙

　ＮＨ_２シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ１５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用ＮＨ_２シリカゲル（シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの）３６０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　シリカゲルミニカラム　内径１０ｍｍ、長さ２５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル６９０ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　多孔性ケイソウ土カラム　内径約２ｃｍのカラムに２０ｍｌ保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　緩衝液　０．２ｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム溶液に０．２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えてｐＨ３に調整したもの

　カルフェントラゾンエチル標準品　本品は、カルフェントラゾンエチル９７．６％以上を含み、融点は−２０℃以下である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（小麦の場合は試料１０ｇに緩衝液２０ｍｌを加えて３０分間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、これにアセトン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で２０ｍｌに濃縮する。

　この濃縮液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、１０分間放置する。ヘキサン１００ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン１０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液（９：１）１５ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、ＮＨ_２シリカゲルミニカラムにヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液（１９：１）１０ｍｌで展開し、溶出液を５０ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

　この残留物にアセトンを加えて溶かし、２ｍｌ（小麦の場合は１ｍｌ）として試験溶液とする。

　２（３６４）の次に次のように加える。

　（３６５）　フルチアセットメチル試験法

ア　装置　アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。

イ　試薬試液

　アセトニトリル　アセトニトリル（特級）

　アセトン　アセトン（特級）

　塩化ナトリウム　塩化ナトリウム（特級）

　酢酸エチル　酢酸エチル（特級）

　ヘキサン　ヘキサン（特級）

　無水硫酸ナトリウム　無水硫酸ナトリウム（特級）

　メタノール　メタノール（特級）

　ケイソウ土　化学分析用ケイソウ土

　グラファイトカーボンミニカラム　内径１５ｍｍ、長さ６５ｍｍのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン５００ｍｇを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの

　シリカゲル　カラムクロマトグラフィー用シリカゲル

　フルチアセットメチル標準品　本品は、フルチアセットメチル９９％以上を含み、融点は１０５．０〜１０６．５℃である。

ウ　試験溶液の調製

　検体２０ｇ相当の試料（乾燥子実の場合は試料１０ｇに水２０ｍｌを加えて２時間放置したもの）を３００ｍｌの三角フラスコに量り取り、メタノール及び蒸留水の混液（２：１）１００ｍｌを加え、振とう機を用いて３０分間激しく振とうした後、ケイソウ土を１ｃｍの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻して同混液５０ｍｌを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を５００ｍｌの分液漏斗に合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液５０ｍｌ及びヘキサン１００ｍｌを加え、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、ヘキサン層を分取する。残った水層についてもヘキサン１００ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全ヘキサン層を５００ｍｌの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム２０ｇを加え、時々振り混ぜながら３０分間放置した後、５００ｍｌのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコをヘキサン２０ｍｌで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。

　この残留物をアセトニトリル飽和へキサン３０ｍｌ、次いでヘキサン飽和アセトニトリル３０ｍｌで１００ｍｌの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて５分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についても、ヘキサン飽和アセトニトリル３０ｍｌを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を２００ｍｌのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサンを加えて溶かし、１０ｍｌとする。

　あらかじめ、１３０℃で４時間加熱活性化したシリカゲル５ｇをヘキサンでクロマト管（内径１．５ｃｍ、長さ３０ｃｍのガラス管）に充てんしておく。これに上記の溶液２ｍｌ（乾燥子実の場合は４ｍｌ）を流し入れ、ヘキサン２０ｍｌ次いでヘキサン及び酢酸エチルの混液（４：１）５０ｍｌで展開し、流出液を捨てる。続いてヘキサン及び酢酸エチルの混液（１３：７）１５０ｍｌで展開し、溶出液を３００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル５ｍｌを加えて溶かす。

　あらかじめ、グラファイトカーボンミニカラムにアセトニトリル５ｍｌを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル５ｍｌで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル５０ｍｌで展開し、溶出液を１００ｍｌのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて４０℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトンを加えて溶かし、２ｍｌとして試験溶液とする。

エ　ガスクロマトグラフの操作条件

　分離管　内径０．２〜約０．７ｍｍ、長さ１０〜３０ｍの溶融シリカ製の管の内面にメチルポリシロキサンを０．１〜１．５μｍの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。

　試料導入部温度　スプリットレス方式の場合は２００〜２７０℃、コールドオンカラム方式の場合は５０〜約１００℃

　分離管槽昇温プログラム　１００℃で２分保ち、１００〜約２７０℃の範囲で毎分２〜２０℃の昇温を行う。

　検出器温度　２８０〜３００℃

　ガス流量　キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径０．２〜約０．７ｍｍの分離管に対して線速度を毎秒２０〜４０ｃｍとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス（高純度窒素ガス又はヘリウムガス）の流量を至適条件になるように調整する。

　感度　フルチアセットメチルの０．０４ｎｇが十分確認できるように感度を調整する。

オ　検量線の作成

　フルチアセットメチル標準品の０．０２〜０．４ｍｇ／Ｌアセトン溶液を数点調製し、それぞれを２μｌずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってフルチアセットメチルの検量線を作成する。

カ　定量試験

　試験溶液から２μｌを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりフルチアセットメチルの重量を求め、これに基づき、検体中のフルチアセットメチルの濃度を算出する。