[平成一三・四・二六 環告三一]
農薬取締法第三条第二項の規定により定められた同条第一項第四号から第七号までに掲げる場合に該当するかどうかの基準を定める等の件第一号イの環境大臣の定める基準を定める件(昭和四十八年七月環境庁告示第四十六号)の一部を次のように改正し、公布の日から適用する。
1の表N―(3、5―ジクロロフェニル)―1、2―ジメチルシクロプロパン―1、2―ジカルボキシミド(別名プロシミドン)の項を次のように改める。
N―(3,5―ジクロロフェニル)―1,2―ジメチルシクロプロパン―1,2―ジカルボキシミド(別名プロシミドン)
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みかん |
1ppm |
みかん以外のかんきつ類 | 0.5ppm | |
第一大粒果実類 | 5ppm | |
第二大粒果実類 | 0.5ppm | |
小粒果実類 | 5ppm | |
第一果菜類 | 5ppm | |
第二果菜類 | 5ppm | |
第一葉菜類 |
0.5ppm |
|
第二葉菜類 | 5ppm | |
鱗茎類 | 0.5ppm | |
いも類 | 0.5ppm | |
大豆 | 2ppm | |
大豆以外の豆類 | 5ppm |
1の表2―tert―ブチルイミノ―3―イソプロピル―5―フェニルペルヒドロ―1、3、5―チアジアジン―4―オン(別名ブプロフェジン)の項を次のように改める。
2―tert―ブチルイミノ―3―イソプロピル―5―フェニルペルヒドロ―1,3,5―チアジアジン―4―オン(別名ブプロフェジン)
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米 |
0.5ppm |
小麦 | 0.3ppm | |
みかん | 0.3ppm | |
みかん以外のかんきつ類 | 2ppm | |
第一大粒果実類 | 1ppm | |
第二大粒果実類 | 0.5ppm | |
なし | 2ppm | |
小粒果実類 |
0.5ppm |
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ナッツ類 | 0.1ppm | |
第二果菜類 | 1ppm | |
ふき | 5ppm | |
茶 | 20ppm |
1の表5―エチル―5、8―ジヒドロ―8―オキソ[1、3]ジオキソロ[4、5―g]キノリン―7―カルボン酸(別名オキソリニック酸)の項を次のように改める。
5―エチル―5,8―ジヒドロ―8―オキソ[1,3]ジオキソロ[4,5―g]キノリン―7―カルボン酸(別名オキソリニック酸)
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米 |
0.5ppm |
第二大粒果実類 | 0.5ppm | |
第一葉菜類 | 2ppm | |
第二葉菜類 | 2ppm | |
根・茎類 | 0.2ppm | |
鱗茎類 | 0.1ppm | |
いも類 | 0.5ppm |
1の表4―[3―(4―クロロフェニル)―3―(3、4―ジメトキシフェニル)アクリロイル]モルホリン(別名ジメトモルフ)の項を次のように改める。
4―[3―(4―クロロフェニル)―3―(3,4―ジメトキシフェニル)アクリロイル]モルホリン(別名ジメトモルフ)
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小粒果実類 |
Z体及びE体の和として5ppm |
第二果菜類 | Z体及びE体の和として2ppm | |
第一葉菜類 | Z体及びE体の和として1ppm | |
第二葉菜類 | Z体及びE体の和として2ppm | |
鱗茎類 | Z体及びE体の和として0.1ppm | |
いも類 | Z体及びE体の和として0.1ppm |
1の表S、S―ジ―sec―ブチル O―エチル ホスホロジチオアート(別名カズサホス)の項の次に次のように加える。
1―(アリルオキシカルボニル)―1―メチルエチル 2―クロロ―5―[1,2,3,6―テトラヒドロ―3―メチル―2,6―ジオキソ―4―(トリフルオロメチル)ピリミジン―1―イル]ベンゾアート(別名ブタフェナシル) | みかん | 0.1ppm |
みかん以外のかんきつ類 |
0.1ppm |
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第二大粒果実類 | 0.1ppm | |
4―クロロ―2―シアノ―N,N―ジメチル―5―p―トリルイミダゾール―1―スルホンアミド(別名シアゾファミド)
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第一大粒果実類 |
0.1ppm |
小粒果実類 | 10ppm | |
第二果菜類 | 2ppm | |
いも類 | 0.1ppm | |
3―(6―クロロ―3―ピリジルメチル)―1,3―チアゾリジン―2―イリデンシアナミド(別名チアクロプリド)
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米 |
0.1ppm |
第一大粒果実類 | 1ppm | |
第二大粒果実類 | 2ppm | |
小粒果実類 | 5ppm | |
第一果菜類 | 5ppm | |
第二果菜類 | 1ppm | |
いも類 | 0.1ppm | |
茶 | 25ppm | |
(RS)―4―(4―クロロフェニル)―2―フェニル―2―(1H―1,2,4―トリアゾール―1―イルメチル)ブチロニトリル(別名フェンブコナゾール)
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第一大粒果実類 |
0.2ppm |
第二大粒果実類 | 1ppm | |
小粒果実類 | 5ppm | |
茶 | 5ppm | |
3―(2―クロロ―4―メシルベンゾイル)―2―フェニルチオビシクロ[3,2,1]オクタ―2―エン―4―オン(別名ベンゾビシクロン)
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米 | 0.1ppm |
メチル(RS)―7―クロロ―2,3,4a,5―テトラヒドロ―2―[メトキシカルボニル(4―トリフルオロメトキシフェニル)カルバモイル]インデノ[1,2―e][1,3,4]オキサジアジン―4a―カルボキシラート(別名インドキサカルブMP)
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第一葉菜類 |
1ppm |
だいこんの葉 | 5ppm | |
根・茎類 | 0.1ppm | |
いも類 | 0.1ppm | |
てんさい | 0.1ppm | |
メチル(E)―メトキシイミノ―{(E)―α―[1―(α,α,α―トリフルオロ―m―トリル)エチリデンアミノオキシ]―o―トリル}―アセタート(別名トリフロキシストロビン)
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第二大粒果実類 |
5ppm
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第二果菜類 | 1ppm |
2(109)を次のように改める。
(109) プロシミドン試験法
ア 装置 アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
塩化ナトリウム 塩化ナトリウム(特級)
ジエチルエーテル ジエチルエーテル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
無水硫酸ナトリウム 無水硫酸ナトリウム(特級)
硝酸銀 硝酸銀(特級)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
ケイ酸マグネシウム カラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム
硝酸銀ケイ酸マグネシウム あらかじめ、130℃で4時間加熱して活性化したケイ酸マグネシウムに10w/w%の粉砕した硝酸銀を加えて十分に混ぜ合わせたものを用時調整する。
プロシミドン標準品 本品は、プロシミドン99%以上を含み、融点は165.5〜167℃である。
ウ 試験溶液の調製
A法(果実、野菜及びいも類の場合)
1) 検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、アセトン150mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン100mlを加え、同様の振とう機及び分取の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
2) この濃縮液を5%塩化ナトリウム溶液200ml及びヘキサン100mlで500mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、ヘキサン層を分取する。残った水層についても、ヘキサン100mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全ヘキサン層を300mlの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム20gを加え、時々振り混ぜながら30分間放置した後、300mlのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコをヘキサン20mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去し、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)10mlを加えて溶かす。
3) あらかじめ、130℃で4時間加熱して活性化したケイ酸マグネシウム(たまねぎの場合は、硝酸銀ケイ酸マグネシウム)10gをヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)でクロマト管(内径1.5cm、長さ30cmのガラス管)に充てんし、その上から無水硫酸ナトリウム5gを同混液で充てんしておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)100mlで展開し、流出液を捨てる。次いで、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(17:3)100mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサンを加えて溶かし、4mlとして試験溶液とする。
B法(豆類の場合)
試料10gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20mlを加えて2時間放置する。この試料についてA法の1)及び2)のうちヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)10mlに溶かす操作を除いた操作を行う。この残留物をアセトニトリル飽和ヘキサン30ml及びヘキサン飽和アセトニトリル30mlで100mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を分取する。残ったヘキサン層についてもヘキサン飽和アセトニトリル30mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全アセトニトリル層を200mlの分液漏斗に合わせ、アセトニトリル飽和へキサン50mlを加え、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、アセトニトリル層を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物をヘキサン10mlに溶かす。以下、この溶液についてA法の3)と同様の操作を行う。
エ ガスクロマトグラフの操作条件
分離管 内径0.2〜約0.7mm、長さ10〜30mの溶融シリカ製の管の内面に5%フェニルメチルポリシロキサンを0.1〜1.5μmの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。
試料導入部温度 スプリットレス方式の場合は200〜270℃、コールドオンカラム方式の場合は50〜100℃
分離管槽昇温プログラム 100℃で2分保ち、100〜約280℃の範囲で毎分2〜20℃の昇温を行う。
検出器温度 280〜300℃
ガス流量 キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径0.2〜約0.7mmの分離管に対して線速度を毎秒20〜40cmとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス(高純度窒素ガス又はヘリウムガス)の流量を至適条件になるように調整する。
感度 プロシミドンの0.1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
プロシミドン標準品の0.05〜1mg/Lヘキサン溶液を数点調製し、それぞれを2μlずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってプロシミドンの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から2μlを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりプロシミドンの重量を求め、これに基づき、検体中のプロシミドンの濃度を算出する。
2(296)ウA法中「(たまねぎを除く。)」を「(たまねぎ及びねぎを除く。)」に、「ヘキサン及びアセトンの混液(17:3)90mlで展開し、溶出液を捨てる。」を「ヘキサン及びアセトンの混液(17:3)90mlで展開し、流出液を捨てる。」に改め、2(296)ウB法中「(たまねぎの場合)」を「(たまねぎ及びねぎの場合)」に、「これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ」を「これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ(ねぎの場合はナス型フラスコ中の溶液の2mlを分取して流し入れ)」に改める。
2(347)の次に次のように加える。
(348) ブタフェナシル試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
ジエチルエーテル ジエチルエーテル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
メタノール メタノール(特級)
アルミナミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ1710mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
グラファイトカーボンミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用グラファイトカーボン500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
C18シリカゲルミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用C18シリカゲル(シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの)500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ブタフェナシル標準品 本品は、ブタフェナシル99.5%以上を含み、融点は113〜113.6℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、メタノール100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にメタノールを加えて200mlとする。この溶液の100mlを300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で10mlに濃縮する。
この濃縮液に蒸留水10mlを加え、多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(9:1)60mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液(1:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、C18シリカゲルミニカラムにメタノール5ml、次いで蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水及びメタノールの混液(1:1)5mlで展開し、流出液を捨てる。C18シリカゲルミニカラムの下にグラファイトカーボンミニカラム(あらかじめ、メタノール5ml、次いで蒸留水5mlを流し入れ、洗浄したもの)を連結し、メタノール及び蒸留水の混液(4:1)10mlで展開し、流出液を捨てた後、C18シリカゲルミニカラムを分離する。グラファイトカーボンミニカラムにメタノール10mlを流し入れて展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(49:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、アルミナミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(49:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いで、ヘキサン及びアセトンの混液(17:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、2mlとしてブタフェナシルの試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を用い、ブタフェナシルが10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長270nmで測定する。
感度 ブタフェナシルの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
ブタフェナシル標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれを20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってブタフェナシルの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりブタフェナシルの重量を求め、これに基づき、検体中のブタフェナシル濃度を算出する。
(349) シアゾファミド試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
ジエチルエーテル ジエチルエーテル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
炭酸ナトリウム 炭酸ナトリウム(特級)
ガラス繊維ろ紙 化学分析用ガラス繊維ろ紙
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム910mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シアゾファミド標準品 本品は、シアゾファミド99.0%以上を含み、融点は152.7℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコ中に合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で15mlに濃縮し、0.3mol/L炭酸ナトリウム5mlを加える。
この溶液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。ヘキサン100mlで展開し、溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(19:1)10mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(17:3)10mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(17:3)10mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液(7:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。
この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、4mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル及び蒸留水の混液(3:2)を用い、シアゾファミドが10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長280nmで測定する。
感度 シアゾファミドの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
シアゾファミド標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれ20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってシアゾファミドの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりシアゾファミドの重量を求め、これに基づき、検体中のシアゾファミドの濃度を算出する。
(350) チアクロプリド試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
塩化ナトリウム 塩化ナトリウム(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
アルミナミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用中性アルミナ1710mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
NH2シリカゲルミニカラム 内径9mm、長さ60mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用NH2シリカゲル(シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの)360mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
チアクロプリド標準品 本品は、チアクロプリド98.0%以上を含み、融点は135〜136℃である。
3―(6―クロロ―3―ピリジルメチル)―1,3―チアゾリジン―2―イリデンアミノカルボキサミド(以下「アミド体」という。)標準品 本品は、アミド体98.0%以上を含み、融点は158〜160℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料(米の場合は試料10gに水20mlを加えて2時間放置したもの、茶の場合は試料5gに水20mlを加えて2時間放置したもの)を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトニトリル及び水の混液(4:1)100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にアセトニトリルを加えて200mlとする。この溶液の50ml(米の場合は100ml、茶の場合は20ml)を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で5mlに濃縮する。
この濃縮液に10%塩化ナトリウム溶液10mlを加え、多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。ヘキサン80mlで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)100mlで展開し、溶出液を200mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチルの混液(3:2)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン及び酢酸エチルの混液(3:2)5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(3:2)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びヘキサンの混液(3:2)30mlで展開し、溶出液を100mlのナス型フラスコに取り、これをチアクロプリド溶出液とする。続いて酢酸エチル及びアセトンの混液(9:1)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、これをアミド体溶出液とする。
チアクロプリド溶出液をすり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この
残留物にアセトニトリル5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、アルミナミニカラムにアセトニトリル5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル15mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液(3:2)を加えて溶かし、2mlとしてチアクロプリドの試験溶液とする。
アミド体溶出液をすり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及び酢酸エチルの混液(7:3)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、NH2シリカゲルミニカラムにヘキサン及び酢酸エチルの混液(7:3)5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及び酢酸エチルの混液(7:3)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いで酢酸エチル及びアセトンの混液(7:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)を加えて溶かし、2mlとしてアミド体の試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 チアクロプリドの場合は蒸留水及びアセトニトリルの混液(3:2)を用い、チアクロプリドが8〜12分で流出するように流速を調整する。アミド体の場合は蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)を用い、アミド体が10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長240nmで測定する。
感度 チアクロプリド及びアミド体のそれぞれ0.5ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
チアクロプリド標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びアセトニトリルの混液(3:2)で希釈して0.0125〜0.25mg/L溶液を数点調製し、それぞれを40μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってチアクロプリドの検量線を作成する。
アミド体標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液を蒸留水及びアセトニトリルの混液(4:1)で希釈して0.0125〜0.25mg/L溶液を数点調製し、それぞれを40μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってアミド体の検量線を作成する。
カ 定量試験
チアクロプリド及びアミド体の試験溶液からそれぞれ40μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりチアクロプリド及びアミド体の重量を求める。このチアクロプリドの重量の値とアミド体の重量の値に係数0.93を乗じてチアクロプリドの値に換算したものとを和し、これに基づき、検体中のチアクロプリドの濃度を算出する。
(351) フェンブコナゾール試験法
ア 装置 アルカリ熱イオン型検出器又は高感度窒素・リン検出器付きガスクロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトン アセトン(特級)
塩化アンモニウム 塩化アンモニウム(特級)
塩化ナトリウム 塩化ナトリウム(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
トルエン トルエン(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
ポリエチレングリコール ポリエチレングリコール(平均分子量400のもの)
無水硫酸ナトリウム 無水硫酸ナトリウム(特級)
メタノール メタノール(特級)
リン酸 リン酸(特級)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用合成ケイ酸マグネシウム910mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
凝固液 塩化アンモニウム2gにリン酸4ml及び蒸留水400mlを加えたもの
フェンブコナゾール標準品 本品は、フェンブコナゾール99.5%以上を含み、融点は127℃である。
cis―5―(4―クロロフェニル)―ジヒドロ―3―フェニル―3―(メチル―1H―1,2,4―トリアゾール―1―イル)―2―3H―フラノン(以下「ラクトン体A」という。)標準品 本品は、ラクトン体A99.8%以上を含み、融点は126〜128℃である。
trans―5―(4―クロロフェニル)―ジヒドロ―3―フェニル―3―(メチル―1H―1,2,4―トリアゾール―1―イル)―2―3H―フラノン(以下「ラクトン体B」という。)標準品 本品は、ラクトン体B99.2%以上を含み、融点は112〜114℃である。
ウ 試験溶液の調製
A法(果実の場合)
1) 検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、メタノール100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この濃縮液を5%塩化ナトリウム溶液100ml、次いで酢酸エチル50mlで300mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、酢酸エチル層を分取する。残った水層についても、酢酸エチル50mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム20gを加え、時々振り混ぜながら30分間放置した後、300mlのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを酢酸エチル20mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。
2) あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(9:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(7:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びアセトンの混液(9:1)15mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(7:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に0.05%ポリエチレングリコールトルエン溶液を加えて溶かし、2mlとして試験溶液とする。
B法(茶の場合)
試料5gを300mlの三角フラスコに量り取り、水20mlを加えて2時間放置する。これにメタノール100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液にメタノールを加えて200mlとする。その80mlを500mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で10mlに濃縮する。
この濃縮液にアセトン30ml、凝固液50ml及びケイソウ土2gを加えて緩やかに振り混ぜ、5分間放置した後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。使用したナス型フラスコを凝固液及びアセトンの混液(5:3)40mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、吸引ろ過する。全ろ液を300mlの分液漏斗に合わせ、酢酸エチル50mlを加え、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、酢酸エチル層を分取する。残った水層についても、酢酸エチル50mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全酢酸エチル層を300mlの三角フラスコに合わせ、無水硫酸ナトリウム20gを加え、時々振り混ぜながら30分間放置した後、300mlのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコを酢酸エチル20mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びアセトンの混液(9:1)5mlを加えて溶かす。以下、この溶液についてA法の2)と同様の操作を行う。
エ ガスクロマトグラフの操作条件
分離管 内径0.2〜約0.7mm、長さ10〜30mの溶融シリカ製の管の内面に50%フェニルメチルポリシロキサンを0.1〜1.5μmの厚さで被覆したもの又はこれと同等の分離性能を有するものを用いる。
試料導入部温度 スプリットレス方式の場合は200〜270℃、コールドオンカラム方式の場合は50〜100℃
分離管槽昇温プログラム 100℃で2分保ち、100〜約280℃の範囲で毎分2〜20℃の昇温を行う。
検出器温度 280〜300℃
ガス流量 キャリヤーガスとして高純度窒素ガス又はヘリウムガスを用い、内径0.2〜約0.7mmの分離管に対して線速度を毎秒20〜40cmとするとともに、水素ガス、空気及び追加ガス(高純度窒素ガス又はヘリウムガス)の流量を至適条件になるように調整する。
感度 フェンブコナゾール、ラクトン体A及びラクトン体Bのそれぞれ0.1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
フェンブコナゾール標準品、ラクトン体A標準品及びラクトン体B標準品のそれぞれ0.05〜1mg/Lの0.05%ポリエチレングリコールトルエン溶液を数点調製し、それぞれを2μlずつガスクロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってフェンブコナゾール、ラクトン体A及びラクトン体Bの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から2μlを取り、ガスクロマトグラフに注入し、オの検量線によりフェンブコナゾール、ラクトン体A及びラクトン体Bの重量を求める。このフェンブコナゾールの重量の値と、ラクトン体A及びラクトン体Bの重量の値にそれぞれ係数0.95を乗じてフェンブコナゾールの重量に換算したものとを和し、これに基づき、検体中のフェンブコナゾールの濃度を算出する。
(352) ベンゾビシクロン試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸 酢酸(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
リン酸 リン酸(特級)
ガラス繊維ろ紙 化学分析用ガラス繊維ろ紙
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ポリスチレンミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用スチレンジビニルベンゼン共重合体(ポリスチレン系ゲル、粒径50μm)500mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
SAXミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用SAXシリカゲル(シリカゲルにトリメチルアミノプロピル基を化学的に結合させたもの)1000mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
ベンゾビシクロン標準品 本品は、ベンゾビシクロン99.0%以上を含み、融点は188〜189℃である。
ウ 試験溶液の調製
試料10gを300mlの三角フラスコに量り取り、0.15mol/Lリン酸20mlを加えて2時間放置する。これにアセトニトリル100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトニトリル50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコ中に合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
あらかじめ、ポリスチレンミニカラムにアセトニトリル5ml及び蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水及びアセトニトリルの混液(3:2)10mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでアセトニトリル及び蒸留水の混液(4:1)10mlで展開し、溶出液を50mlの三角フラスコに取り、これに蒸留水10mlを加える
この溶液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。酢酸エチル120mlで展開し、溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン、アセトン及び酢酸の混液(19:1:0.2)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン、アセトン及び酢酸の混液(19:1:0.2)5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン、アセトン及び酢酸の混液(19:1:0.2)10mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでヘキサン、アセトン及び酢酸の混液(3:2:0.05)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、SAXミニカラムにアセトニトリル5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、アセトニトリル10mlで展開し、全溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、2mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル、蒸留水及びリン酸の混液(3:2:0.005)を用い、ベンゾビシクロンが10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長320nmで測定する。
感度 ベンゾビシクロンの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
ベンゾビシクロン標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれ20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってベンゾビシクロンの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりベンゾビシクロンの重量を求め、これに基づき、試料中のベンゾビシクロンの濃度を算出する。
(353) インドキサカルブMP試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
酢酸エチル 酢酸エチル(特級)
ジエチルエーテル ジエチルエーテル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
メタノール メタノール(特級)
リン酸 リン酸(特級)
ガラス繊維ろ紙 化学分析用ガラス繊維ろ紙
ケイ酸マグネシウムミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用ケイ酸マグネシウム910mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
多孔性ケイソウ土カラム 内径約2cmのカラムに20ml保持量のカラムクロマトグラフィー用顆粒状多孔性ケイソウ土を充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
C18シリカゲルミニカラム 内径15mm、長さ65mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用C18シリカゲル(シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたもの)1000mgを充填したもの又はこれと同等の性能を有するもの
インドキサカルブMP標準品 本品は、インドキサカルブMP99.0%以上を含み、融点は140〜141℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、これにメタノール100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ガラス繊維ろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してメタノール50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコ中に合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で20mlに濃縮する。
この溶液を多孔性ケイソウ土カラムに流し入れ、10分間放置する。酢酸エチル及びヘキサンの混液(1:1)140mlで展開し、溶出液を300mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、ケイ酸マグネシウムミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(7:3)20mlで展開し、流出液を捨てる。次いでヘキサン及びアセトンの混液(17:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(9:1)20mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでヘキサン及びジエチルエーテルの混液(7:3)20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物に蒸留水及びメタノールの混液(1:1)5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、C18シリカゲルミニカラムにメタノール5ml及び蒸留水5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、蒸留水及びメタノールの混液(1:1)15mlで展開し、この流出液を捨てる。次いでメタノール20mlで展開し、溶出液を50mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(7:3)を加えて溶かし、4mlとして試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル、蒸留水及びリン酸の混液(70:30:0.05)を用い、インドキサカルブMPが10〜15分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長310nmで測定する。
感度 インドキサカルブMPの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
インドキサカルブMP標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(7:3)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれ20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってインドキサカルブMPの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりインドキサカルブMPの重量を求め、これに基づき、検体中のインドキサカルブMPの濃度を算出する。
(354) トリフロキシストロビン試験法
ア 装置 紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフを用いる。
イ 試薬試液
アセトニトリル アセトニトリル(特級)
アセトン アセトン(特級)
塩化ナトリウム 塩化ナトリウム(特級)
ジエチルエーテル ジエチルエーテル(特級)
ヘキサン ヘキサン(特級)
液相分離ろ紙 液相分離ろ紙(化学分析用ろ紙をシリコン処理したもの)
ケイソウ土 化学分析用ケイソウ土
シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ25mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用シリカゲル690mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
NH2シリカゲルミニカラム 内径10mm、長さ13mmのカラムにカラムクロマトグラフィー用NH2シリカゲル(シリカゲルにアミノプロピル基を化学的に結合させたもの)360mgを充てんしたもの又はこれと同等の性能を有するもの
トリフロキシストロビン標準品 本品は、トリフロキシストロビン99.0%以上を含み、融点は72〜73℃である。
ウ 試験溶液の調製
検体20g相当の試料を300mlの三角フラスコに量り取り、これにアセトン100mlを加え、振とう機を用いて30分間激しく振とうした後、ケイソウ土を1cmの厚さに敷いたろ紙を用いて吸引ろ過する。ろ紙上の残留物についても、三角フラスコに戻してアセトン50mlを加え、同様の振とう及びろ過の操作を繰り返す。全ろ液を500mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で約10mlに濃縮する。
この濃縮液を5%塩化ナトリウム溶液50ml、次いでヘキサン50mlで300mlの分液漏斗に洗い入れ、振とう機を用いて5分間激しく振とうし、暫時放置した後、ヘキサン層を分取する。残った水層についても、ヘキサン50mlを加え、同様の振とう及び分取の操作を繰り返す。全ヘキサン層を300mlの三角フラスコに合わせ、液相分離ろ紙を用いて300mlのナス型フラスコ中にろ過する。使用した三角フラスコをヘキサン30mlで洗い、その洗液でろ紙上の残留物を洗い、その洗液をナス型フラスコに合わせ、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめ、シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン15mlで展開し、流出液を捨てる。次いで、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(9:1)30mlで展開し、溶出液を100mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にヘキサン5mlを加えて溶かす。
あらかじめNH2シリカゲルミニカラムにヘキサン5mlを流し入れ、洗浄しておく。これにナス型フラスコ中の溶液を流し入れ、ヘキサン20mlで展開し、流出液を捨てる。次いで、ヘキサン及びジエチルエーテルの混液(19:1)30mlで展開し、溶出液を100mlのナス型フラスコに取り、すり合わせ減圧濃縮器を用いて40℃以下で溶媒を留去する。この残留物にアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を加えて溶かし、8mlとしてトリフロキシストロビンの試験溶液とする。
エ 高速液体クロマトグラフの操作条件
充てん剤 シリカゲルにオクタデシルシランを化学的に結合させたものを用いる。
分離管 内径2〜6mm、長さ15〜30cmのステンレス管を用いる。
分離管槽温度 40℃
溶離液 アセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)を用い、トリフロキシストロビンが40〜45分で流出するように流速を調整する。
検出器 波長250nmで測定する。
感度 トリフロキシストロビンの1ngが十分確認できるように感度を調整する。
オ 検量線の作成
トリフロキシストロビン標準品の500mg/Lアセトニトリル溶液を調製し、この溶液をアセトニトリル及び蒸留水の混液(1:1)で希釈して0.05〜1mg/L溶液を数点調製し、それぞれを20μlずつ高速液体クロマトグラフに注入し、縦軸にピーク高、横軸に重量を取ってトリフロキシストロビンの検量線を作成する。
カ 定量試験
試験溶液から20μlを取り、高速液体クロマトグラフに注入し、オの検量線によりトリフロキシストロビンの重量を求め、これに基づき、検体中のトリフロキシストロビンの濃度を算出する。