研究成果報告書 J95F0324.HTM

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[Ｆ−３　希少野生動物の遺伝的多様性とその保存に関する研究]

（２）希少野生動物の生息域外保全および増殖技術に関する研究

�つ士犹聾鏡舷�細胞の体外培養・凍結保存及び移植に関する研究


[研究担当者]

●張　一国

環境庁エコーフロンティアフェロー

●高橋慎司

国立環境研究所地域環境研究グループ　主任研究員

●渡辺　信

国立環境研究所生物圏環境部　環境微生物研究室　室長

[共同研究者名]

●大野忠夫

理化学研究所ジーンバンク室　室長

●日下部守昭

理化学研究所細胞生物研究室

●Jae Yong Han

Ph.D., Dept. of Animal Science and Technology,
College of Agriculture and Life Sciences, Seoul National University

[平成７年度予算額]

７，００１千円


[要旨]

　鳥類の受精卵は大きいために、凍結保存は極めて困難であることから、その遺伝資源の保存方法として初期の生殖細胞である始原生殖細胞（Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　Ｇｅｒｍ　Ｃｅｌｌｓ，　ＰＧＣ）の利用が考えられた。鳥類のＰＧＣを分離・培養・保存ならびに移植することにより、鳥類における遺伝資源の保存が可能となるものと考えられる。鳥類のＰＧＣは初期胚発生において、生殖巣以外の場所に起源し、血流に乗って移住し、生殖巣に定着・増殖し、そこで配偶子を形成する。本研究では、このようなＰＧＣの性質を利用して生殖巣に定着した後のＰＧＣ（ｇｏｎａｄａｌ　ＰＧＣｓ，　ｇＰＧＣ）の培養および移植について検討した。
　生殖巣間質細胞を培養し、均一に継代して培養１日目および５日目に、それぞれＰＡＳ染色を行い、ｇＰＧＣを計測した結果、それぞれ平均８６８個および３３４７個であり、平均３．８借に増加していたことが明らかになった。継代後５日目以降の培養観察においてｇＰＧＣはさらに増殖を続け、その中には大きなコロニーを形成するものも確認された。一方、培養中のＰＧＣを簡便で効率的な凍結保存方法を開発し、低温保存（−８０℃）して融解した結果、ｇＰＧＣの生存率は約６５％であった。
　培養後のｇＰＧＣが生殖巣に移住し、増殖できるかを調べるために、ｇＰＧＣの移植実験を行った。移植に用いたｇＰＧＣは、生殖巣間質細胞から酵素を用いない緩やかに撹拌する方法によって得られた。分離されたｇＰＧＣに対してはＰＡＳ染色によって、ほぼ純粋なｇＰＧＣであることを確認した。分離したｇＰＧＣ（ドナー）を共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した結果、レシピエント胚の生殖巣内に蛍光色素に標識されたドナーｇＰＧＣが観察され、生殖系列キメラになっていることが確認された。しかも、レシピエント生殖巣の中で移植後の３日間に平均約５倍に増加していた。現在、さらに培養後分離したニワトリおよびウズラのｇＰＧＣを移植し、生殖系列キメラニワトリとウズラを作製し、その後代を得る研究を行っている。
　本研究の結果を基に野生鳥類における遺伝資源の保存技術を実用化することが期待される。


[キーワード]

Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ（ＰＧＣｓ）、　Ｃｈｉｃｋ、　Ｑｕａｉｌ、　Ａｖｉａｎ、　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｏｃｋ